Фбс блок масса: Масса ФБС блоков - Справочник массы - Стройматериалы в Иркутске

Вес блоков ФБС | Фундамент для Дома

Железобетонные изделия повсеместно применяются в современном строительстве. Их используют для укладки фундамента и возведения стен. Самое главное достоинство ФБС блоков в том, что на объект строительства их доставляют уже изготовленными секциями, а это экономит время, поскольку не требуется ждать затвердевания.
Хоть вес блоков ФБС значительный, существует специальная строительная автотехника, которая транспортирует материалы на стройку.

Железобетонные конструкции можно использовать в условиях практически с любым климатом, так как они наделены непревзойденными техническими характеристиками.

Вес фундаментных блоков ФБС и свойства зависят от типа изделия.

Основные типы бетонных блоков и их вес

Фундаментные блоки различают по форме и конструкции. Они бывают:

Сплошные;
Пустотные;
Сплошные с вырезом.

Конструкции сплошного типа характеризуются полностью заполненным пространством. Их наполняют армированной арматурой или заполняют бетоном. Эти блоки выдерживают значительную нагрузку и их прочность, в отличие от других изделий, наивысшая. Следовательно, вес фундаментного блока сплошного типа больше, зависит от габаритов конструкции и колеблется от 300 кг до 2000 кг.

Сплошные блоки со специальными пазами позволяют прокладывать всевозможные коммуникации. Они имеют вырезы, поэтому и вес бетонных блоков ФБС намного меньше сплошных. Такой вид конструкции снижает время на подключение теплосетей к источнику электроэнергии, зданий к водопроводу или системам теплоснабжения. Вес каждого из этих блоков достигает 500-700 кг.

Блоки пустотного типа производятся с полостями, которые в процессе строительства заполняют различными материалами, проводят гидроизоляцию или применяют теплоизоляцию.

Они намного легче остальных конструкций и поэтому применяются в тех ситуациях, когда в связи с геологическими условиями невозможно использование сплошных секций большой массы.

Вес блоков ФБС пустотного типа варьируется от 20 кг до 200 кг.

На вес фундаментных блоков ФБС также влияет материал, из которого они изготовлены (тяжелый бетон, силикатный бетон или керамзитобетон).

Зависимость веса ФБС блоков от размеров

Блоки ФБС размеры и вес которых взаимосвязаны, изготавливаются из бетона тяжелого типа с высокой плотности. Каждое изделие маркируют, принято такое условное обозначение:

Аббревиатура: ФБС;

Габариты: первое значение – длина, второй показатель – ширина, а третья цифра – высота;
Материал: «Т» — тяжелый бетон, «С» — силикатный и т.д.

Высота каждого блока одинакова. Она составляет 58 см. А вот от длины и ширины изделий зависит вес блоков ФБС. Железобетонный блок длиной в 88 см и шириной от 30 до 60 см будет весить 350-700 кг. К этим изделиям относят ФБС 9-3-6т, ФБС 9-4-6т, ФБС 9-5-6т, а также ФБС 9-6-6т.

Конструкции с длиной в 118 см и шириной от 30 до 60 см будут весить больше. К ним относят ФБС с маркировкой 12-6-6, 12-5-6, 12-4-6, 12-3-6. Вес блоков ФБС составит 450-1000 килограмм.

ФБС с габаритами 238х30х60см, 238х40х60см, 238х50х60см и 238х60х60см весят 950-2000 килограмм.

В государственном стандарте, регламентирующем производство железобетонных изделий, указаны блоки ФБС размеры и вес. Можно подробно ознакомиться с этим документом, где указаны технические требования изготовления блоков из силикатных и тяжелых бетонов плотностью не меньше 1800 кг/м3.

Зачем необходимо знать массу ФБС блоков

Государственный стандарт ГОСТ 13579-78 нормирует не только прочностные характеристики железобетонных изделий, а также устанавливает габаритные размеры и массу. Зачем нужно знать, сколько весит фундаментный блок? Это необходимо для контроля качества изделий. В строительных условиях на объекте невозможно определить плотность бетона, а вес является именно тем показателем, который указывает на это значение.

Зная, сколько весит блок ФБС и сколько таких блоков потребуется для возведения фундамента или с другой целью строительства, можно правильно выбрать спецтехнику для транспортировки, погрузки и разгрузки конструкций, укладки. Такие блоки поставляют 10-ти и 20-ти тонной техникой.

И если вы владеете информацией о массе ФБС блоков, вы сможете сэкономить значительное количество денежных средств на транспортировке громоздких секций.

Важно учитывать и простои, непредвиденные ситуации в процессе доставки груза на объект.

Огромный вес блоков ФБС – это их недостаток, однако в процессе строительства он играет важную роль, поскольку сказывается на качестве и прочности фундамента, определяет надежность строения и обеспечивает долгий срок службы.

Блоки ФБС размеры согласно ГОСТ 13579-78, База ЖБИ.

ФБС согласно ГОСТ 13579-78 расшифровывается как “Фундаментные блоки сплошные”. Блоки ФБС размеры которых приведены ниже, производятся на железобетонных комбинатах посредством формовочного литья. Их используют в качестве элементов сборного фундамента. Строительстве цокольных помещений, подвалов, стен промышленных зданий.

Производитель ФБС в Москве

Основным преимуществом использования блоков ФБС является скорость строительства и прочность готового основания. Эти бетонные изделия не армируются, т.е. при их создании практически не используется арматура. Металл применяется только в качестве монтажных петель. Средний расход стали (для ФБС 24-4-6) полтора килограмма. Используемый бетон по ГОСТ – марки B-7.5 (М100) и B-15 (М200). Несмотря на низкое качество бетонной смеси, ФБС отлично держат статичные нагрузки на сжатие. Они очень хрупкие, легко ломаются при ударе. В силу своей правильной геометрической формы, сборка фундамента происходит по принципу конструктора “Лего”. Проектировщик на стадии подготовки документации подбирает элементы фундаментного строительства по заданным размерам здания.

Сводная выдержка из таблиц ГОСТ 13579-78

Буквенные индексы означают:

Т – тяжелый бетон.
П – пористый бетон (керамзитобетон)
С – плотный бетон (силикатный)

ИЗДЕЛИЕ	Марка бетона	Д (l) в мм.	Ш (b) в мм.	В (h) в мм.	Вес тонн
ФБС 24-3-6 Т	B 7,5 (M100)	2380	300	580	0.97
ФБС 24-4-6 Т	B 7,5 (M100)	2380	400	580	1.3
ФБС 24-5-6 Т	B 7,5 (M100)	2380	500	580	1.63
ФБС 24-6-6 Т	B 7,5 (M100)	2380	600	580	1.96
ФБС 24-3-6 П	B 7,5 (M100)	2380	300	580	0.73
ФБС 24-4-6 П	B 7,5 (M100)	2380	400	580	0.98
ФБС 24-5-6 П	B 7,5 (M100)	2380	500	580	1.22
ФБС 24-6-6 П	B 7,5 (M100)	2380	600	580	1.47
ФБС 24-3-6 С	B 15 (М200)	2380	300	580	0.81
ФБС 24-4-6 С	B 15 (М200)	2380	400	580	1.09
ФБС 24-5-6 С	B 15 (М200)	2380	500	580	1.36
ФБС 24-6-6 С	B 15 (М200)	2380	600	580	1.63

Размеры фундаментных блоков

В таблице ниже представлены все типовые размеры блоков фундаментного строительства.

Блоки ФБС размеры

Блоки ФБС размеры и цены

Наша компания является производителем фундаментных блоков в Московском регионе. Мы предлагаем заказчикам бетонные изделия высокого качества. ФБС нашего производства это:

Бетон марки М 100 на гравийном щебне.
Идеальная геометрия фундаментного блока.
Большой складской запас самых ходовых позиций (ФБС 24-4-6, ФБС 24-6-6).
Своевременная доставка заказчику.
Индивидуальный подход к каждому клиенту в расчете на долговременное сотрудничество.

Кроме того мы готовы принять заказ на индивидуальные требования потребителя. Например изготовить фундаментные блоки на гранитном щебне или на марке бетона М-300. Мы открыты к диалогу и готовы рассмотреть условия сотрудничества.

Звоните – договоримся!

+7 (495) 640-61-66

Наша группа в ВК.

Статьи — Фундаментные блоки ФБС: технические характеристики, виды, укладка

Высокопрочные бетонные изделия сегодня являются прекрасной альтернативой монолитному фундаменту. Износоустойчивые конструкции широко используют при возведении производственных, промышленных, складских и жилых объектов. Блоки ФБС обладают превосходными прочностными характеристиками и эксплуатационными качествами. Дополнительно можно отметить стабильность геометрических размеров и долговечность.

Строительный рынок предлагает богатое разнообразие видов и размеров фундаментных блоков. Изделия имеют различную маркировку, например, продукция А3 является лицевой и предназначена под покраску, А6 лицевая неотделываемая, то есть не требует обработки. Маркировка содержит информацию также о типе бетона. Понимание и знание принципа маркировки позволит проверить стройматериал по заданным критериям.

Изготовление блоков ФБС для фундамента

Стройматериал производят из тяжелого бетона, силикатно-бетонной смеси, керамзитобетона. Заготовка проходит естественную просушку в камерах в течение установленного производителем срока и пропарку. Уникальная технология производства обеспечивает необходимый коэффициент прочности.

Процесс производства выглядит следующим образом:

Приготовление смеси. Цемент смешивают водой в специальной емкости. Встроенные лопасти обеспечивают быстрое и эффективное перемешивание.
Формирование блоков. Жидкостную массу загружают в форму. На крупных производственных предприятиях имеются специальные бетононасосы-пневмонагнетатели.
Уплотнение продукции. Следующим этапом производится уплотнение бетона, просушка и пропарка. При этом соблюдаются установленные технологические регламенты.

На каждом предприятии имеется отдел ОТК, который проверяет блоки ФБС на соответствие требуемым характеристикам и эксплуатационным параметрам. Современные производственные мощности позволяют на выходе получать высокопрочный стройматериал, используемый для возведения различных строений.

Конструктивные особенности

Расшифровываются ФБС блоки как «фундаментные блоки сплошные». Их главная особенность в том, что они идут без пустот, способны выдерживать повышенную нагрузку, могут эксплуатироваться в течение 100 лет и более. Например, фундаментные блоки ЖБИ ФБП имеют пустоты. По своим показателям они значительно уступают блокам ФБС, выполненным по ГОСТу. Среди их конструктивных особенностей можно выделить следующие моменты.

Монтажные петли. Изделие изготавливают из прочной арматуры толщиной 12 мм. Петли используются для перемещения блоков на место проведения работ.
Фигурные выемки. Специальные конструкции предназначены для соединения изделий между собой. Места прилегания затем заливают бетонной смесью для надежной фиксации.

Бетонная система имеет также маркировку прочности, например М100 стандартное изделие, а М200 отличается повышенной прочностью. Сегодня можно купить фундаментные блоки армированного и неармированного типа. Первые выделяются прочностью и износоустойчивостью, чаще используются для возведения крупных объектов. При изготовлении используют железную арматуру марки А1. В каждом конкретном случае необходимо учитывать также показатель механических нагрузок, возможные температурные перепады и коэффициент влажности.

Характеристика фундаментных блоков

Высокая плотность. В среднем она составляет 1800-2500 кг/м3. В соответствии с утвержденными стандартами вес блока ФБС составляет примерно около 1500 кг, зависит от марки и типа сырья.
Прочность. Для больших объектов рекомендуется приобретать изделия из бетона марки В3.5 (М50) и В15 (М200). При возведении хозблоков подойдет блочная система из бетона В7.5 (М100).
Водонепроницаемость. Влагостойкость купленных блоков ФБС должна быть не меньше W2.
Морозоустойчивость. Продукция должна выдерживать более 55 циклов заморозки и разморозки.

Дополнительно следует отметить, что каждый блок ФБС отличается размерами. В основном производители поставляют модели длиной от 880 до 2380 мм. Ширина ФБС блоков может быть от 300 до 600 мм. Важным параметром при приобретении блока ФБС является высота. Чаще всего она составляет 580 мм. Если вы приобретаете изделие, промаркированное как ФБС-9-4-6п, значит продукция имеет длину 880 мм, ширину 400 мм, высоту 580 мм. Буква на конце означает из чего блок ФБС состоит, из плотного силиката, керамзитобетона или бетона.

Сфера применения

Продукция используется для формирования фундаментного основания. Инновационные технологии позволяют производить укладку блоков ФБС на различных поверхностях, даже в тех местах, где фиксируются подвижные грунты. К их ключевым преимуществам относится то, что нет необходимости возводить опалубку. Система пропаривания и вибрирования обеспечивает повышенную прочность. Рекомендуется приобретать изделие максимальной длины. Чем меньше стыков и швов, тем надежнее готовая конструкция.

Виды фундаментных блоков

Наибольшей популярностью для возведения оснований используются изделия ФБС. Они не имеют внутри пустот, характеризуются повышенной прочностью. При выборе подходящего вида ФБС блоков необходимо знать, что они подразделяются на категории. Например, А3-А6 означает, что они устанавливаются с лицевой стороны, а А7 с не лицевой.

Интернет-магазин «Первый стройцентр Сатурн-Р» предлагает приобрести фундаментные блоки по выгодной стоимости различных размеров с монтажными петлями. Реализуемая продукция полностью соответствует требованиям ГОСТ, прошла необходимые проверки. По запросу клиента готовы предоставить сертификаты и техническую документацию, которая позволит удостовериться в безукоризненном качестве продукции.

Фундамент из фундаментных блоков: основные плюсы и минусы

Высокая морозоустойчивость и водостойкость. Материал устойчив к перепадам температуры и агрессивной среде.
Быстрый монтаж. Технология устройства фундаментного основания из ФБС блоков довольно простая. Нет необходимости возводить опалубку, заливать бетонную массу и выполнять другие манипуляции.
Длительный эксплуатационный период. Средний срок службы составляет 100-150 лет при соблюдении схемы раскладки ФБС блоков и правильной эксплуатации объекта.
Повышенная прочность. Готовая конструкция имеет высокую плотность. Наличие специальных выемок помогает надежно соединять изделия между собой.
Доступная стоимость блоков ФБС. Возведение данной конструкции обойдется значительно дешевле монолитной. Последняя требует больших финансовых вложений.

Бетонные изделия недостатков практически не имеют, за исключением большой массы, что требует привлечения тяжелой крупногабаритной техники. Сборная конструкция требует обвязки с применением армирующего пояса из бетонной смеси. Устройство фундамента блоками ФБС выполнять достаточно легко, необходимо лишь исполнять строительные нормы и правила. Главное заранее рассчитать количество элементов для возведения объекта, чтобы исключить переплату за материал.

Особенности расчета количества блоков ФБС

При формировании инженерной документации необходимо произвести расчет следующих элементов:

Толщина стеновых покрытий.
Вес готовой конструкции.
Возможная устойчивость грунта.

Если на объекте фиксируется плохая устойчивость почвенного покрова, лучше использовать изделия внушительных размеров, например, блоки длиной 2380 мм. В каждом конкретном случае необходимо определить количество материала. Предварительно потребуется выполнить раскладку по длине и высоте. По мнению экспертов оптимальным вариантом будет тот, в котором на одну плоскость приходится не более 4-6 элементов.

Технология монтажа фундаментных блоков

В самом начале формируется песчано-гравийная смесь. Она выполняет важную выравнивающую функцию. Обычно толщина песчаной подушки составляет 15-20 см. Для начала изделие укладывают по углам, затем проверяют их по уровню, после этого протягивают шнур и ведут последующую укладку. Перевязка вертикальных швов производится путем заполнения пустошовных швов блоков ФБС раствором. Швы должны быть тщательно заполнены бетонной смесью.

Богатый выбор размеров позволит возвести фундамент различной конфигурации для любого объекта. Высокая прочность конструкции гарантирована на любом типе грунта при соблюдении условий монтажа.

ФБС 24-6-6 т по стандарту: ГОСТ 13579-78

Фундаментные блоки сплошные ФБС 24-6-6 т – это надежная основа. Прочность, стойкость и долговечность – это лишь часть свойств, которым должна отвечать основа дома. Фундаментные блоки ФБС 24-6-6 т – «суровый» строительный материал, который представляет собой железобетонный краеугольный камень. Широкое применение этих элементов для строительства фундаментных конструкций не оставляет сомнений, что это действительно подходящий для этого материал. Может быть произведено строительство как жилых, так и производственных зданий.

1.Варианты написания маркировки.

Обозначение фундаментных блоков ФБС 24-6-6 т осуществляется согласно ГОСТ 13579-78 и включает две группы: буквенная – тип изделия, цифровая – размеры и класс по прочности. Написание маркировки производится следующими вариантами (ошибки в любом случае – нет):

1. ФБС 24-6-6 т т ;

2. ФБС 24-6-6 т п ;

3. ФБС 24-6-6 т ш ;

4. ФБС 24-6-6 т с ;

2.Основная сфера применения.

Блоки сплошного сечения ФБС 24-6-6 т используются для строительства сборных фундаментов для зданий различного назначения. Это могут быть как жилые дома, так и производственные строения. Блоки данного вида могут быть использованы и для дачного строительства, где заливка фундаментной конструкции не может быть произведена вручную. За счет особой формы этих железобетонных изделий строительство объекта сокращается по срокам вдвое.

Технология укладки блоков ФБС 24-6-6 т в качестве фундамента и стен подвального или технического подземного помещения полностью оправдывает себя на практике, как наиболее простая и быстровозводимая. Подвалы могут иметь различную глубину. Фундаментные блоки ФБС 24-6-6 т могут быть применены для возведения технических зданий и неотапливаемых помещений. Монтаж фундаментных элементов производится при помощи спецтехники, для подъема на высоту используют монтажные петли. В качестве захватов используют однорогие крюки с защелкой.

3.Обозначение маркировки изделий

Фундаментные блоки сплошного сечения ФБС 24-6-6 т маркируют согласно ГОСТ 13579-78. В группе обозначений указывают тип изделия, размерный ряд. Габаритные размеры блока составляют 2380х600х580 , где соответственно указаны длина, ширина и высота.

Рассмотрим обозначение ФБС 24-6-6 т, где маркированы следующие параметры:

1. ФБС – фундаментный блок сплошной;

2. 24 – длина, указывается в дц.;

3. 6 – ширина, указывается в дц.;

4. 6 – высота, указывается в дц.

Дополнительные данные для характеристики фундаментных блоков сплошного сечения:

1. Масса – 1960 ;

2. Геометрический объем изделия – 0,8282 ;

3. Объем бетона, расходуемый на один элемент – 0,82 ;

Маркировочные знаки, дата изготовления и вес изделий должны быть нанесены на торцевую грань несмываемой черной краской. Дополнительно может быть указан товарный знак компании-производителя.

4.Основные материалы для изготовления и характеристики.

В качестве основного материала для изготовления блоков сплошного сечения ФБС 24-6-6 т используется пористый бетон. Это прочный и долговечный материал, который проявляет высокие свойства стойкости к действию различных сред. Пористая структура изделий обеспечивает их высокую теплопроводность. Малый вес позволяет не обустраивать внушительное основание для фундамента. Высокая несущая способность (могут быть построены стены в 1,5 кирпича) значительно расширяет сферу использования фундаментных блоков сплошного сечения. Так как «работа» производится под действием постоянных сдавливающих и сжимающих деформаций, блоки должны быть армированы. Плотность должна соответствовать величине – не менее чем 1800 кг/м3. Марка по прочности на сжатие должна соответствовать пределам М100, допускается применять марки М50 и М200. Бетон должен также отвечать требованиям по водонепроницаемости и морозостойкости (температурный диапазон достигает до -70 градусов), так как эксплуатация осуществляется в достаточно жестких условиях. Не допускается к закладке в фундамент элементов с трещинами, наплывами, сколами и торчащими элементами арматурной сетки. Армируется в редких случаях, используется стальная углеродистая проволока класса А1 и А111. Подобные дефекты снижают несущую способность готового элемента и приводят к его быстрой негодности (под действием пучения грунтов и в условиях постоянного действия грунтовых вод). На выходе блок ФБС 24-6-6 т должен соответствовать заявленным качествам согласно ГОСТ 13579-78.

5.Хранение и транспортировка.

Хранение блоков сплошных ФБС 24-6-6 т производится в штабелях. Послойно укладывают деревянные подкладки. Под штабель обустраивается щебенчато-песчаная подушка. Предпочтительна сортировка по видам и сортам изделий. Транспортирование железобетонных блоков для фундаментов производится посредством спецтранспорта с надежным закреплением каждого изделия. Не допускается перегрузка транспорта, обязательно учитывается грузоподъемность машины.

Уважаемые покупатели! Сайт носит информационный характер. Указанные на сайте информация не являются публичной офертой (ст.435 ГК РФ). Стоимость и наличие товара просьба уточнять в офисе продаж или по телефону 8 (800) 500-22-52

зачем его знать и таблица типовых показателей

Вес фундаментных блоков играет важную роль при строительстве. По нему определают, сколько элементов необходимо для изготовления фундамента и сможет ли основание выдержать возложенную на него нагрузку. Также это главный параметр, который учитывают при выборе специальной техники для транспортировки и монтажа ФБС.

Общие характеристики

ФБС – это фундаментные сплошные блоки, которые используют при монтаже стен основания. Представлены они в виде вылитых из бетона параллелепипедов, внутренняя часть которых не имеет пустот. На торцах каждого изделия расположены пазы для соединения строительных элементов друг с другом. Монтажные петли находятся на верхней поверхности.

Их изготавливают из тяжелых, керамзитных или плотных силикатных марок бетона. Они имеют стандартные размеры и вес согласно ГОСТ.

В маркировке этих строительных элементов размеры округлены до дециметров.

Типовыми принято считать ширину изделий от 30 до 60 см, высоту – 60 см или 30 см, длину от 60 до 240 см. Таким образом, маркировка ФБС 100-4-3 Л имеет расшифровку:

100 – длина плиты, приравнивается к 100 см.;
4 – ширина изделия, составляет 40 см.;
3 – высота строительного элемента, соответственно 30 см.
Л – изделие сделано из легкого бетона.

Аббревиатура обозначает не только размеры, но и тип смеси, из которой изготовлено блоки: «Т» – из тяжелого бетона, «П» – из керамзита, «С» – из силикатного раствора.

Посмотрите видео, как производится заливка блока в специальную форму.

В зависимости от марки ФБС изменяется вес изделия, который можно посмотреть в таблице 1.

Таблица 1. Марки блоков

Марка плиты, наличие армирования (для увеличения несущие способности стройматериала), а также марка бетона, примененные для изготовления ФБС, выбираются на этапе проектных работ, в зависимости от нагрузки, действующей на основание под подошвой фундамента.

Сколько нужно изделий для строительства фундамента или стен, рассчитывается в зависимости от несущих свойств ФБС и их геометрической формы.

Зачем нужно знать вес плит

Недостатком блоков является то, что процесс их монтажа достаточно сложен

ФБС используют для монтажа фундамента и возведения стен. Основное их достоинство состоит в том, что на строительную площадку эти конструкции поступают в готовом виде, поэтому не нужно тратить время на достижение бетоном нужной прочности. Это значительно ускоряет работу.

При изготовлении указанных строительных элементов используют специальные технологии: просушку или пропарку изделий в заводских условиях, это обеспечивает блокам стандартную степень твердости, морозостойкости и прочности на сжатие. Для защиты плит от агрессивного действия атмосферных и грунтовых вод их покрывают гидроизоляционным слоем на основе битума.

Вес плит зависит от размера изделий и марки бетона, который использовался при их изготовлении, плюс количество армирования. Он сказывается на качестве и прочности основы. Узнать его можно воспользовавшись сортаментом.

Определив, сколько весят блоки, строители могут посчитать сколько техники необходимо для их доставки и монтажа, а также рассчитать нагрузку, которую сможет выдержать фундамент из ФБС.

Конечно, расчет фундамента желательно доверить профессионалам, но можно для этих целей воспользоваться и онлайн-калькулятором. Для самостоятельного подсчета количества блоков основы нужно разделить объем фундамента на объем одного блока. После этого выбрать размеры ФБС, которые при суммировании равны размеру фундамента.

Марка раствора, из которого изготовлена плита, а также наличие в ней пустот уменьшает допустимые нагрузки на этот блок. Если все расчеты сделаны правильно, то по итогам строительных работ хозяева получат устойчивый и долговечный фундамент.

Рекомендуем посмотреть видео, как использовать блоки при заложении основания для дома.

Размеры плиты, марка бетона также сказываются на массе блока. Узнав, сколько весит изделие (взвесив этот строительный элемент), можно рассчитать его плотность и сравнить ее с заявленной плотностью завода. Так вам удастся обезопасить себя от подделки.

Предпочтительнее покупать сертифицированную продукцию известных марок, зарекомендовавших себя на строительном рынке. Если отсутствует сертификат качества на стройматериал от него лучше отказаться, ведь неизвестно какими техническими характеристиками он обладает.

Блоки ФБС : ООО ПК Равновесие

Наименование изделия	Масса, т	L, мм	B, мм	Н, мм	Цена, руб.
ФБС 9-3-6т Блок стен подвалов	0,35	880	300	580	661,3
ФБС 9-4-6т Блок стен подвалов	0,47	880	400	580	887,4
ФБС 9-5-6т Блок стен подвалов	0,59	880	500	580	1110,1
ФБС 9-6-6т Блок стен подвалов	0,7	880	600	580	1334,5
ФБС 12-3-6т Блок стен подвалов	0,46	1180	300	580	853,4
ФБС 12-4-6т Блок стен подвалов	0,64	1180	400	580	1110,95
ФБС 12-5-6т Блок стен подвалов	0,79	1180	500	580	1392,3
ФБС 12-6-6т Блок стен подвалов	0,96	1180	600	580	1675,35
ФБС 24-3-6т Блок стен подвалов	0,97	2380	300	580	1644,75
ФБС 24-4-6т Блок стен подвалов	1,3	2380	400	580	2188,75
ФБС 24-5-6т Блок стен подвалов	1,63	2380	500	580	2734,45
ФБС 24-6-6т Блок стен подвалов	1,96	2380	600	580	3277,6

Блок ФБС — особый вид железобетонных изделий, необходимый для формирования основания здания. С помощью бетонных блоков укрепляется подвал, стены цокольного этажа, техническое подполье. Если использовать ФБС, фундамент постройки получится более прочным и будет стабильно противостоять нагрузкам даже в песчаном грунте. Монтаж ленточного основания с помощью фундаментных блоков в значительной мере сокращает временные затраты.

Маркировка, размеры и виды бетонных блоков под фундамент

По маркировке изделий можно получить исчерпывающую информацию о параметрах стройматериала. Приняты следующие обозначения:

первая цифра — округленная длина блока ФБС в дециметрах;
вторая — ширина, также в дециметрах;
третья — высота;
литера «т» — тип раствора, из которого отлит блок, а именно — «тяжелый бетон».

Например, если необходимо купить фундаментный блок 2400х400х600 мм, надо выбрать позицию — ФБС 24 4 6т.

Размер и вес изделия подбираются в строгом соответствии ожидаемым нагрузкам. В частном домостроении популярны ФБС 400х200х200, их цена за штуку невелика, а масса не превышает 32 кг. Иногда они могут быть обозначены несколько иначе — ФБС 200х200х400 или 20х20х40. Бетонное основание с использованием таких элементов может быть устроено без применения спецтехники, силами нескольких человек. Бетонные полнотелые блоки 400х200х200 незаменимы при устройстве фундамента или возведении несущей стены, а пустотелые подходят для некапитальных стен и перегородок.

Отличить пустотелые и полнотелые ФБС можно по наличию щелевых пустот. Выбор того или иного изделия определяется потребностями заказчика. Пустотелый ФБС 200х200х400 обладает хорошими тепло- и звукоизоляционными свойствами, а стоимость его ниже, чем за полнотелый элемент тех же габаритов. С другой стороны, в железобетонной конструкции, выполненной из полнотелых изделий лучше держатся анкера и дюбели.

Особенности производства

Стандартный полнотелый ФБС изготовлен из бетонного раствора марки М100 методом вибропрессовки. Форма, в которую заливают смесь, представляет собой параллелепипед. Торцы могут иметь специальные пазы для удобства хвата и укладки. Пустотелый бетонный блок иногда отливают из М150, хотя этот вариант встречается редко. Формы для заливки имеют выступы, позволяющие создать отверстия в изделии. Чем больше объем пустот, тем ниже общая прочность элемента, но и цена за штуку будет ниже.

Преимущества бетонных фундаментных блоков

долговечность и прочность;
морозостойкость;
отсутствие необходимости вязания арматурного каркаса;
простота монтажа.

Купить ФБС в Нижнем Новгороде от производителя можно в ПК «Равновесие». В прайс-листе представлен широкий ассортимент блоков для фундамента, изготовленных по нормам ГОСТ. Цена на блоки формируется без посреднических процентов и зависит только от стоимости бетонной смеси. Для получения более подробной информации позвоните по любому из указанных номеров или оставьте сообщение на сайте.

Фундаментные блоки (ФБС) в Набережных Челнах

ФБС фундаментные блоки используются при строительстве фундаментов, стен подвалов и т.п. Широко используются и при строительстве обыкновенных жилых домов, и при строительстве крупных промышленных объектов. Блоки представляют из себя железобетонные изделия при изготовлении которых используется бетон высоких сортов, а также армированная арматура. Для изготовления ФБС придерживаются стандартов и ГОСТ 13579-78. Сами блоки нужны для того, чтобы обеспечить прочную основу всей несущей конструкции сооружения. В некоторых случаях используются как ограждения или заграждения.

Каталог ФБС

Преимущество использования ФБС

Есть несколько основных плюсов, которые делают выбор в пользу фунламетных блоков при строительстве объектов.

Время. При использовании ФБС не требуется выжидать время, как например при использовании основания ленточного типа. Стеновые панели из блоков можно начинать возводить сразу же, как будет готов фундамент!
Широкий выбор различных размеров блоков позволяет без труда подобрать блоки нужного вам размера, а заводское качество гарантирует их высокую стойкость и долговечность.
Благодаря стандартизации на ФБС вы без труда определите нужное вам для строительства количество блоков, что поможет при составлении сметы и при работе.
При изготовлении ФБС используются специальные присадки, что позволяет этим блокам быть морозоустойчивыми и неподверженными атакам агрессивной среды.

Блоки ФБС при правильном использовании спокойно служат по 70-90 лет без деформаций и разрушений, но! Важно обратить внимание на следующие детали:
* Использовать ФБС лучше всего в теплое время года в период, когда нет осадков.
* Самостоятельно изготовить блоки, соответствующие всем нормам безопасности нельзя!

Таблица размеров фундаментных блоков

№ позиции	Наименование изделия	Размеры
№ позиции	Наименование изделия	Длина, мм	Ширина, мм	Высота, мм	Масса ед., кг

1	ФБС 9.3.6Т	880	300	580	350.0
2	ФБС 9.4.6Т	880	400	580	490.0
3	ФБС 9.5.6Т	880	500	580	595.0
4	ФБС 9.6.6Т	880	600	580	730.0
5	ФБС 12.3.6Т	1180	300	580	485.0
6	ФБС 12.4.6Т	1180	400	580	650.0
7	ФБС 12.5.6Т	1180	500	580	815.0
8	ФБС 12.6.6Т	1180	600	580	980.0
9	ФБС 24.3.6Т	2380	300	580	970.0
10	ФБС 24.4.6Т	2380	400	580	1 300.0
11	ФБС 24.5.6Т	2380	500	580	1 630.0
12	ФБС 24.6.6Т	2380	600	580	1 960.0

Доставка продукции

Мы поставим вам ФБС в Набережных Челнах, а так же в любую точку Ресупублики Татарстан в кратчайшие сроки. Благодаря собственному автопарку у нас есть возможность выполнять заказы сразу, без проволочек для поисков средств доставки. Мы доставляем заказы по графику и 24 часа 7 дней в неделю. Мы гарантируем качество и скорость выполнения заказа.

Конечная цена доставки Фундаментных блоков ФБС зависит от:

удаленности точки доставки
размеров блока и необходимого колличества
назначения сооружения и гидрогеологических условий
выбора грузоподъемности и габаритов транспортного средства, осуществляющего доставку

Сравнительный анализ дифференциально секретируемых белков в бессывороточной и содержащей сыворотку средах с использованием BONCAT и импульсного SILAC

Культура клеток и импульсное мечение с AHA и SILAC

U87MG был получен из Korean Cell Line Bank (KCLB). hWJ-MSC были любезно предоставлены профессором Jong Wook Chang из Медицинского центра Samsung, Республика Корея, и культивирование клеток было выполнено в соответствии с его ранее опубликованным методом ⁴⁹. U87MG и hWJ-MSC культивировали в среде DMEM (Gibco, Rockville, MD) с добавлением 10% FBS (Gibco, Rockville, MD), 1% пенициллина и стрептомицина (Gibco, Rockville, MD) при 37 ° C в увлажненной 95 % воздуха, 5% CO _{2 инкубатор}.Клетки высевали 2,2 × 10 ⁶ клеток в чашки для культивирования 100 мм (Nunc, Naperville, IL) или 5 × 10 ⁶ клеток в чашки для культивирования 150 мм и инкубировали в течение 24 часов. В экспериментах по оптимизации BONCAT культивируемые клетки сначала обедняли метионином в среде без метионина (Gibco) с 10% диализованным FBS в течение 1 часа, а затем инкубировали в течение 24 часов в той же среде с добавлением 1 мМ AHA (Invitrogen, Carlsbad. , CA) и 10% диализованного FBS. В случае экспериментов BONCAT-pSILAC клетки были истощены по метионину, лизину и аргинину в обедненной среде (состав DMEM без GMP без метионина, аргинина и лизина; Gibco) с 10% диализованным FBS в течение 1 часа, а затем инкубировали в течение 24 ч в той же среде с добавлением 1 мМ AHA и либо 0.398 мМ [¹³ C ₆, ¹⁵ N ₄] L-аргинин и 0,789 мМ [¹³ C ₆, ¹⁵ N ₂] L-лизин (Cambridge Isotope Laboratories, Inc.) в виде тяжелого изотопа с 10% диализованного FBS или 0,398 мМ [¹³ C ₆] L-аргинина и 0,789 мМ [4,4,5,5-D ₄] L-лизина (Cambridge Isotope Laboratories, Inc.) как средний изотоп без FBS. После инкубации осторожно собирали питательную среду. Плавающие клетки и клеточный дебрис удаляли центрифугированием (400 × g, 10 мин, 4 ° C) с последующей стерильной фильтрацией (размер пор: 0.22 мкм, Millipore, MA). Любая среда, содержащая 5% или 10% FBS, называется SCM, а любая среда без FBS — SFM.

Обогащение вновь синтезированных белков с помощью фильтра и переваривание на гранулах

Недавно синтезированные и секретированные белки были обогащены из концентрированной среды с использованием набора Click-iT® Protein Enrichment Kit (Invitrogen C10416), используя протокол поставщика с небольшими изменениями ¹¹. Обычно для концентрированного SCM использовали 100 мкл суспензии агарозной смолы.Чтобы определить подходящий объем SCM для реакции CuAAC, эксперименты по обогащению проводили при пяти различных объемных условиях (3, 10, 20, 30 и 60 мл) среды, содержащей 10% FBS. SCM концентрировали до ~ 250 мкл путем ультрафильтрации с использованием устройств для центробежных фильтров Amicon Ultra-15 (Millipore, MA) и заменяли на денатурационный буфер, содержащий 8 М мочевину и 100 мМ Трис (pH 8,2), повторяя разбавление. ультрафильтрация дважды. Реакцию CuAAC проводили в течение ночи при комнатной температуре после смешивания образца с соответствующей смолой и растворами, предоставленными поставщиком.Всю смесь, доведенную до 0,5 мл водой, затем переносили в центробежный фильтр 0,22 мкм (Millipore). Все водорастворимые материалы были удалены путем вращения блока фильтра, оставив только смолу. После этого смолу с присоединенными белками обрабатывали 20 мМ DTT в 0,5 мл 1% SDS при 70 ° C в течение 15 минут, а затем 40 мМ йодацетамида в 0,5 мл 1% SDS при комнатной температуре в течение 30 минут в темноте. и промывали 0,5 мл 1% SDS, 0,5 мл 8 М мочевины / 100 мМ Трис (pH 8,2) и 0,5 мл 20% ацетонитрила.Каждый этап промывки повторяли не менее пяти раз. Промытую смолу ресуспендировали в буфере, содержащем 100 мМ Трис (pH 8,2), 2 мМ CaCl ₂ и 10% ацетонитрил, смешивали с 0,5 мкг трипсина и инкубировали в течение 16 ч при 37 ° C. Пептиды продукта расщепления трипсина собирали центрифугированием, и смолу промывали 0,5 мл воды. Два раствора объединяли, подкисляли 0,5% TFA и анализировали с помощью ЖХ-МС / МС.

Жидкостная хроматография и тандемная масс-спектрометрия (LC-MS / MS)

Масс-спектрометр LTQ-XL (Thermo Scientific, Сан-Хосе, Калифорния) использовался во время экспериментов по оптимизации BONCAT.Образцы пептидов восстанавливали в 0,4% уксусной кислоте, и одну пятую образца вводили в колонку Magic C18aq с обращенной фазой (15 см × 75 мкм, 200Å, 5U) на системе ВЭЖХ Agilent 1200 (Agilent Technology). Колонку предварительно уравновешивали 95% растворителем A (0,1% муравьиной кислоты в воде) и 5% растворителем B (0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле). Пептиды элюировали при скорости потока 0,4 мкл / мин с линейным градиентом 5-40% растворителя B в течение 120 мин. Напряжение ESI было установлено равным 1,9 кВ, напряжение капилляра — 30 В, а температура нагретого капилляра — 250 ° C.МС-съемку сканировали от 300 до 2000 m / z, после чего следовали три зависимых от данных МС / МС-сканирования со следующими параметрами: ширина изоляции 1,5 m / z; нормализованная энергия столкновения 25%; длительность динамического исключения 180 с. Оптимизационный эксперимент проводился в двух, трех или четырех экземплярах.

Q Exactive масс-спектрометр (Thermo Fisher Scientific) использовали в экспериментах BONCAT-pSILAC. Один микрограмм образца, восстановленного в 0,4% уксусной кислоте, вводили в обращенно-фазовую колонку C18 (20 см × 75 мкм i.д., 3 мкм, 120 Å, в собственной упаковке; Dr. Maisch GmbH) на системе Eksigent nanoLC-ultra 1D plus при 95% растворителе A и 5% растворителе B. Пептиды элюировали с линейным градиентом от 5% до 40% растворителя B в течение 200 мин, а затем 80% растворителя B. промывка и 95% растворитель Повторное уравновешивание при скорости потока 300 нл / мин с общим временем работы 230 мин. Обзорные МС-спектры полного сканирования (m / z 350–1800) были получены с разрешением 70000. Параметры ионизации источника были следующими: напряжение распыления 2,5 кВ; капиллярная температура 300 ° С; и уровень s-линзы, 44.0. Ширина пика МС на полувысоте была <30 с. Спектры МС / МС 12 наиболее интенсивных ионов из сканирования MS1 с зарядовым состоянием ≥2 были получены со следующими параметрами: разрешение 17500; ширина изоляции 2,0 м / з; нормализованная энергия столкновения 27%; порог селекции ионов, 4.00E ± 03 отсчетов; и соответствующий пептид, «предпочтительный». Эксперимент проводили в трех повторностях. Данные масс-спектрометрической протеомики были депонированы в Консорциум ProteomeXchange через репозиторий партнеров PRIDE с идентификатором набора данных PXD007529 ⁵⁰.

Анализ масс-спектрометрических данных

Необработанные данные ЖХ-МС / МС обрабатывали с использованием Sequest HT в Proteome Discoverer 2.1.1.21 (Thermo Fisher Scientific Inc.). Использовалась эталонная база данных протеома UniProtKB человека (выпущена в январе 2016 г .; 20 218 записей) в сочетании со списком экспериментально подтвержденных белков FBS (199 записей), если не указано иное. В нашей предыдущей публикации ⁴ результат поиска данных анализа секретома по такой составной базе данных FBS человека (HFDB) был более надежным с меньшим количеством ложноположительных и ложноотрицательных идентификаций по сравнению с использованием только базы данных человека.Параметры поиска включали два пропущенных сайта расщепления трипсином, карбамидометилирование цистеина как фиксированную модификацию, окисление метионина и ацетилирование N-концевого белка как вариабельные модификации. Идентификацию пептидов проводили с допустимым исходным допуском по массе предшественника до 15 м.д. и допустимым отклонением массы фрагмента 0,05 Да. Результаты по пептидам и белкам были отфильтрованы до 1% FDR. Для проверки включения AHA перед экспериментом по обогащению AHA (-4,9863 Да) и l-2,4-диаминобутаноат (-30.9768 Да), продукт восстановления AHA, были указаны как переменные модификации для метионина.

В случае данных pSILAC Proteome Discoverer 2.2.0.388 использовался с тремя поисковыми системами: Sequest HT, Mascot и MS Amanda. Каждая поисковая машина была настроена на средний и тяжелый изотоп SILAC в виде переменных модификаций с допуском массы предшественника до 15 ppm и допустимым отклонением массы фрагмента 0,05 Да. В окончательный список результатов были включены только белки с хотя бы одним уникальным пептидом, поддерживаемые всеми тремя поисковыми системами.Отношения H / M пептидов рассчитывали путем деления интенсивностей тяжелого изотопа на интенсивности средних изотопов и затем преобразовывали в значения log2. Для вменения пропущенного значения было дано наименьшее целое число, превышающее наибольшее отношение пептидов log2: значение -8 было присвоено пептидам, тяжелый изотоп которых не наблюдался; значение 8 было присвоено пептидам, средний изотоп которых не наблюдался. Соотношение белков представляло собой среднее геометрическое всех уникальных соотношений пептидов.

Совместное культивирование хондроцитов и hWJ-MSC

Человеческие хондроциты, полученные из АТСС (CRL-2847, Манассас, Вирджиния), культивировали в DMEM (Гибко, Роквилл, Мэриленд) с добавлением 10% FBS (Гибко, Роквилл, Мэриленд) , 1% пенициллина и стрептомицина (Gibco, Rockville, MD) при 37 ° C с 5% CO ₂.При ~ 80% конфлюэнтности клетки хондроцитов человека (нижняя камера блока Transwell) культивировали совместно с hWJ-MSC в течение 24 ч в SFM или SCM. МСК hWJ высевали (1 × 10 ⁵ / мл) в верхнюю камеру 6-луночных вкладышей для трансвеллеров (BD Falcon). После 24-часового инкубационного периода клетки собирали трипсинизацией (0,25%, Gibco-Invitrogen) и промывали DPBS (Gibco, Rockville, MD).

Анализ пролиферации клеток

Пролиферацию клеток анализировали с использованием набора для подсчета клеток-8 (CCK-8, Dojindo Molecular Technologies, Кумамото, Япония).Клетки хондроцитов человека (1 × 10 ⁵ / мл, нижняя камера блока Transwell), культивированные совместно с hWJ-MSC (1 × 10 ⁵ / мл, верхняя камера блока Transwell) в 6-луночной камере. -трансвелл за 24 ч. Затем в каждую лунку добавляли 10% раствор CCK-8 и клетки инкубировали в течение 4 ч при 37 ° C с 5% CO ₂. Затем реакционный раствор (по 100 мкл каждого) переносили в 96-луночный планшет и анализировали путем измерения оптической плотности при 450 нм с использованием считывающего устройства для микропланшетов (спектрофотометр Bio-Rad X-Mark, Hercules, CA).

Вестерн-блот-анализ

Клетки лизировали в буфере RIPA (Fisher Scientific, Питтсбург, Пенсильвания) в присутствии коктейля ингибиторов протеазы Xpert (GenDEPOT, Баркер, Техас). Белки разделяли 4–20% гелями трис-глицина (Bio-rad, Hercules, CA) и переносили на нитроцеллюлозную мембрану. Тестируемые антитела включали антитело против циклина D1, антитело против p53 (Cell Signaling, Дэнверс, Массачусетс), антитело против SOX9 (Santa Cruz Biotechnology, Даллас, Техас), антитело против MMP3, антитело против MMP13 (Abcam , Кембридж, Массачусетс) и антитела к β-актину (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури) при 4 ° C в течение ночи.После промывки мембраны инкубировали со вторичным антителом (козлиным антимышиным IgG-HRP; козьим антикроличьим IgG-HRP; Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури) в течение 1 ч при комнатной температуре. Блоты проявляли с использованием ECL (Thermo Scientific Pierce, Rockford, IL), и полосы белка получали путем воздействия на систему обнаружения изображений LAS-4000 (Fujifilm, Токио, Япония).

Биоинформатический анализ

Идентифицированные белки анализировали с помощью биоинформатических инструментов ProteinCenter (Proxeon Bioinformatics, http: // www.cbs.dtu.dk/services). Мы сделали несколько белковых последовательностей в одном файле формата FASTA и отправили его в каждую программу. SignalP (версия 4.0, http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP4.0) использовался для прогнозирования присутствия сигнальных пептидов в идентифицированных белках (значения D-отсечки для сетей SignalP-noTM> 0,45. или сети SignalP-TM> 0,5 в качестве порогового значения по умолчанию для сигнального пептида = «Да») ⁵¹. Программа SecretomeP (версия 2.0, http://www.cbs.dtu.dk/services/SecretomeP2.0) использовалась для прогнозирования возможности неклассической секреции белка (сигнальный пептид SignalP = «Нет»; и оценка SecretomeP> 0.6 в белках млекопитающих) ⁵². Кроме того, программа TMHMM (версия 2.0, http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM2.0) использовалась для прогнозирования трансмембранных спиралей в интегральных мембранных белках ⁵³. Белки экзосом были определены как белки, опубликованные по крайней мере в 100 статьях в EVpedia (http://evpedia.info) ¹⁷. Чтобы предсказать субклеточную локализацию идентифицированных белков, был использован CELLO (версия 2.5, http://cello.life.nctu.edu.tw/) ⁵⁴.

Анализ пути изобретательности (IPA, www.Ingenuity.com/) использовали для проведения анализа данных секретома hWJ-MSC вышестоящим регулятором. Загруженные данные для анализа вышестоящих регуляторов содержат доступ к UniProtKB и отношение log2 идентифицированных белков. Предсказанные вышестоящие регуляторы с Z-оценкой выше 2 и p-значением перекрытия ниже 0,01 считались значительно активированными.

Сравнительное исследование влияния фетальной бычьей сыворотки по сравнению с лошадиной сывороткой на рост и дифференциацию первичных бронхиальных фибробластов лошади | BMC Veterinary Research

Джеффри П.К.: Ремоделирование астмы и хронической обструктивной болезни легких. Am J Respir Crit Care Med. 2001, 164: S28-S38. 10.1164 / ajrccm.164.supplement_2.2106061.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

An SS, Bai TR, Bates JH, Black JL, Brown RH, Brusasco V, Chitano P, Deng L, Dowell M, Eidelman DH, Fabry B, Fairbank NJ, Ford LE, Fredberg JJ, Gerthoffer W.T. , Gilbert SH, Gosens R, Gunst SJ, Halayko AJ, Ingram RH, Irvin CG, James AL, Janssen LJ, King GG, Knight DA, Lauzon AM, Lakser OJ, Ludwig MS, Lutchen KR, Maksym GN, et al: Airway динамика гладких мышц: распространенный путь обструкции дыхательных путей при астме.Eur Respir J. 2007, 29: 834-860. 10.1183 / 0

36.00112606.

PubMed Central Статья CAS PubMed Google Scholar

Ямаути К., Иноуэ Х: Ремоделирование дыхательных путей при астме и необратимое ограничение воздушного потока — отложение ECM в дыхательных путях и возможная терапия для ремоделирования. Аллергол Инт. 2007, 56: 321-329. 10.2332 / аллерголинт.Р-07-151.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

Фернандес Д. Д., Боначчи Дж. В., Стюарт А. Г.: Внеклеточный матрикс, интегрины и мезенхимальные клетки функционируют в дыхательных путях. Curr Drug Targets. 2006, 7: 567-577. 10.2174 / 138945006776818700.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

Брюстер С.Е., Ховарт PH, Джуканович Р., Уилсон Дж., Холгейт С.Т., Рош В.Р .: Миофибробласты и субэпителиальный фиброз при бронхиальной астме. Am J Respir Cell Mol Biol. 1990, 3: 507-511. 10.1165 / ajrcmb / 3.5.507.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

Ichikawa T, Sugiura H, Koarai A, Yanagisawa S, Kanda M, Hayata A, Furukawa K, Akamatsu K, Hirano T, Nakanishi M, Matsunaga K, Minakata Y, Ichinose M: пероксинитрит усиливает опосредованные фибробластами ремоделирование тканей посредством дифференцировки миофибробластов. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2008, 295: L800-L808. 10.1152 / ajplung.

.2008.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

Колодсик Дж. Э., Петерс-Голден М., Лариос Дж., Тэйвс Г. Б., Танникал В. Дж., Мур Б. Б.: Простагландин E2 ингибирует переход фибробластов в миофибробласты посредством передачи сигналов рецептора 2 простаноидов E. и повышения уровня циклического аденозинмонофосфата. Am J Respir Cell Mol Biol. 2003, 29: 537-544. 10.1165 / rcmb.2002-0243OC.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

Haag S, Matthiesen S, Juergens UR, Racké K: мускариновые рецепторы опосредуют стимуляцию синтеза коллагена в фибробластах легких человека.Eur Respir J. 2008, 32: 555-562. 10.1183 / 0

36.00129307.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

Liu X, Ostrom RS, Insel PA: агенты, повышающие цАМФ, и сверхэкспрессия аденилатциклазы способствуют антифибротическому фенотипу в легочных фибробластах. Am Physiol Cell Physiol. 2004, 286: C1089-C1099.

Артикул CAS Google Scholar

10.

Silvestri M, Fregonese L, Sabatini F, Dasic G, Rossi GA: Флутиказон и сальметерол подавляют in vitro пролиферацию фибробластов и экспрессию ICAM-1 или H-CAM.Eur Respir J. 2001, 18: 139-145. 10.1183 / 0

36.01.00067901.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

11.

Matthiesen S, Bahulayan A, Kempkens S, Haag S, Fuhrmann M, Stichnote C, Juergens UR, Racké K: мускариновые рецепторы опосредуют стимуляцию пролиферации фибробластов легких человека. Am J Respir Cell Mol Biol. 2006, 35: 621-627. 10.1165 / rcmb.2005-0343RC.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

12.

Jacques E, Semlali A, Boulet LP, Chakir J: Сверхэкспрессия AP-1 нарушает кортикостероидное ингибирование выработки коллагена фибробластами, выделенными от пациентов с астмой. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2010, 299: L281-L287. 10.1152 / ajplung.00360.2009.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

13.

Sugiura H, Liu X, Duan F, Kawasaki S, Togo S, Kamio K, Wang XQ, Mao L, Ahn Y, Ertl RF, Bargar TW, Berro A, Casale TB, Rennard SI: Культивированные легкие фибробласты от «астматических» мышей, зараженных овальбумином, функционально отличаются от нормальных.Am J Respir Cell Mol Biol. 2007, 37: 424-430. 10.1165 / rcmb.2007-0089OC.

PubMed Central Статья CAS PubMed Google Scholar

14.

Warnken M, Haag S, Matthiesen S, Juergens UR, Racke K: Видовые различия в характере экспрессии изоферментов аргиназы и дифференциальные эффекты ингибирования аргиназы на синтез коллагена в легочных фибробластах человека и крысы. Naunyn Schmied Arch Pharmacol. 2010, 381: 297-304.10.1007 / s00210-009-0489-6.

Артикул CAS Google Scholar

15.

Bettger WJ, McKeehan WL: Механизмы клеточного питания. Physiol Rev.1986, 66: 1-35.

CAS PubMed Google Scholar

16.

Кумар Р.К., О’Грейди Р., Ли В., Смит Л.В., Родс Г.С.: Первичная культура фибробластов легких взрослых мышей в бессывороточной среде: ответы на факторы роста. Exp Cell Res.1991, 193: 398-404. 10.1016 / 0014-4827 (91)

-8.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

17.

Iyer VR, Eisen MB, Ross DT, Schuler G, Moore T., Lee JC, Trent JM, Staudt LM, Hudson J, Boguski MS, Lashkari D, Shalon D, Botstein D, Brown PO: Транскрипционный программа реакции фибробластов человека на сыворотку. Наука. 1999, 283: 83-87. 10.1126 / science.283.5398.83.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

18.

Leicht M, Marx G, Karbach D, Gekle M, Köhler T., Zimmer HG: Механизм гибели клеток сердечных фибробластов крыс, вызванный истощением сыворотки. Mol Cell Biochem. 2003, 251: 119-126. 10.1023 / А: 1025446302759.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

19.

Simm A, Bertsch G, Frank H, Zimmermann U, Hoppe J: Гибель клеток фибробластов AKR-2B после удаления сыворотки: процесс между апоптозом и некрозом. J Cell Sci. 1997, 110: 819-828.

CAS PubMed Google Scholar

20.

Minotti S, Scicchitano BM, Nervi C, Scarpa S, Lucarelli M, Molinaro M, Adamo S: вазопрессин и инсулиноподобные факторы роста синергетически индуцируют миогенез в бессывороточной среде. Рост клеток различается. 1998, 9: 155-163.

CAS PubMed Google Scholar

21.

Гото С., Миядзаки К., Фунабики Т., Ясумицу Х: бессывороточные условия культивирования для анализа секреторных протеиназ во время миогенной дифференцировки миобластов мыши C2C12.Анальная биохимия. 1999, 272: 135-142. 10.1006 / abio.1999.4163.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

22.

Барнс Д., Сато Г.: Бессывороточная культура клеток: объединяющий подход. Клетка. 1980, 22: 649-655. 10.1016 / 0092-8674 (80)

-1.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

23.

Агата Х, Ватанабе Н., Исии Й, Кубо Н., Охима С., Ямадзаки М., Тодзё А., Кагами Х .: Возможность и эффективность инженерии костной ткани с использованием стромальных клеток костного мозга человека, культивируемых в бессывороточных условиях.Biochem Biophys Res Commun. 2009, 382: 353-358. 10.1016 / j.bbrc.2009.03.023.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

24.

Chase LG, Lakshmipathy U, Solchaga LA, Rao MS, Vemuri MC: новая бессывороточная среда для размножения мезенхимальных стволовых клеток человека. Stem Cell Res Ther. 2010, 1: 8-10.1186 / scrt8.

PubMed Central Статья PubMed Google Scholar

25.

Шибеши В., Абрахам Дж., Кнейер С., Элленбергер С., Сигер Дж., Шун Х.А., Унгемах Ф.Р.: Выделение и культивирование первичных эпителиальных клеток трахеи лошадей. In vitro Cell Dev Biol Anim. 2008, 44: 179-184. 10.1007 / s11626-008-9099-8.

Артикул PubMed Google Scholar

26.

Gruenert DC, Finkbeiner WE, Widdicombe JH: Культура и трансформация эпителиальных клеток дыхательных путей человека. Am J Physiol. 1995, 268: L347-L360.

CAS PubMed Google Scholar

27.

Хонн К.В., Сингли Дж. А., Чавин В. Фетальная бычья сыворотка: многомерный стандарт. Proc Soc Exp Biol Med. 1975, 149: 344-347. 10.3181 / 00379727-149-38804.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

28.

Gos M, Miloszewska J, Swoboda P, Trembacz H, Skierski J, Janik P: клеточное покой, индуцированный контактным ингибированием или выводом сыворотки в клетках C3h20T1 / 2. Cell Prolif. 2005, 38: 107-116. 10.1111 / j.1365-2184.2005.00334.Икс.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

29.

Hetzel M, Bachem M, Anders D, Trischler G, Faehling M: Различные эффекты факторов роста на пролиферацию и производство матрикса нормальных и фиброзных фибробластов легких человека. Легкое. 2005, 183: 225-237. 10.1007 / s00408-004-2534-z.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

30.

Чен М., Хуан Дж., Ян Х, Лю Б., Чжан В., Хуан Л., Дэн Ф, Ма Дж, Бай И, Лу Р, Хуан Б., Гао Ц., Чжуо Й, Ге Дж. Голодание по сыворотке. индуцированная синхронизация клеточного цикла облегчает перепрограммирование соматических клеток человека.PLoS One. 2012, 7: e28203-10.1371 / journal.pone.0028203.

PubMed Central Статья CAS PubMed Google Scholar

31.

Fernyhough ME, Hausman GJ, Dodson MV: () Потомство дедифференцированных адипоцитов крупного рогатого скота демонстрирует длительный адипогенез. Клетки Тканевые Органы (Печать). 2008, 188: 359-372. 10.1159 / 000134007.

Артикул CAS Google Scholar

32.

Wu H, Ren Y, Li S, Wang W, Yuan J, Guo X, Liu D, Cang M: культура in vitro и индуцированная дифференцировка сателлитных клеток скелетных мышц овец. Cell Biol Int. 2012, 36: 579-587. 10.1042 / CBI20110487.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

33.

Ахмед Я.А., Татарчуч Л., Пагель С.Н., Дэвис Х.М., Мирамс М., Маки Э.Дж .: Гипертрофия и физиологическая смерть хондроцитов лошадей in vitro. Equine Vet J. 2007, 39: 546-552.10.2746 / 042516407X223699.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

34.

Fedoroff S, Hall C: Влияние сыворотки лошади на дифференцировку нервных клеток в культуре ткани. In vitro. 1979, 15: 641-648. 10.1007 / BF02623400.

Артикул CAS PubMed Google Scholar

35.

Moonen G, Nelson PG: Некоторые физиологические свойства астроцитов в первичных культурах.Динамические свойства глиальных клеток. Отредактировано: Schoffeniels E, Franck G, Hertz L, Towers DB. Нью-Йорк: Pergamon Press; 1978: 389-393.

Google Scholar

36.

Abraham G, Zizzadoro C, Kacza J, Ellenberger C, Abs V, Franke J, Schoon HA, Seeger J, Tesfaigzi Y, Ungemach FR: Рост и дифференциация первичных и пассированных бронхиальных эпителиальных клеток лошадей при обычных и условия культивирования на границе раздела воздух-жидкость. BMC Vet Res.2011, 7: 26-10.1186 / 1746-6148-7-26.

PubMed Central Статья PubMed Google Scholar

37.

Лоури О.Н., Роузбро, штат Нью-Джерси, Фарр А.Л., Рэндалл Р.Дж.: Измерение белка с фенольным реагентом Folin. J Biol Chem. 1951, 193: 265-275.

CAS PubMed Google Scholar

Avantor Fetal Bovine Serum (FBS), происхождение из США

1.	Принятие — ВСЕ ПРОДАЖИ ПОДВЕРГАЮТСЯ И ЯВНО УСЛОВИЯ, СОДЕРЖАЩИЕСЯ ЗДЕСЬ, И ПОМОЩЬЮ ЗАКАЗЧИКА. В ОТНОШЕНИИ ЕГО ПРЕДМЕТА СРОКИ И УСЛОВИЯ, ПРЕДСТАВЛЯЕМЫЕ ЗДЕСЬ, ПРЕДСТАВЛЯЮТ ВСЕ ПОНИМАНИЕ СТОРОН И ЗАМЕНЯЮТ ЛЮБОЕ ПРЕДЫДУЩЕЕ СОГЛАШЕНИЕ (УСТНОЕ ИЛИ Иное). УСЛОВИЯ, СОДЕРЖАЩИЕСЯ ЗДЕСЬ, БУДУТ КОНТРОЛИРОВАТЬСЯ, И ЛЮБЫЕ ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ И / ИЛИ НЕПОСЛЕДОВАТЕЛЬНЫЕ УСЛОВИЯ, УСТАНОВЛЕННЫЕ В ЛЮБЫХ ПОДТВЕРЖДЕНИЯХ, ЗАКАЗАХ НА ПОКУПКУ ИЛИ ПРИНЯТИЯХ, ЗАПРОСЕННЫХ И / ИЛИ ПРЕДОСТАВЛЕННЫХ ПОЛЬЗОВАТЕЛЯМИ.ВАРИАНТЫ НАСТОЯЩИХ УСЛОВИЙ НЕ ЯВЛЯЮТСЯ ОБЯЗАТЕЛЬНЫМИ ДЛЯ VWR, ЕСЛИ НЕ СОГЛАСЕН В НАПИСАНИИ И ПОДПИСАНО ОФИЦЕРОМ ИЛИ ДРУГИМ УПОЛНОМОЧЕННЫМ ПРЕДСТАВИТЕЛЕМ VWR SINGAPORE PTE. LTD. («VWR»). НИКАКИЕ СОТРУДНИКИ ИЛИ АГЕНТЫ VWR НЕ УПОЛНОМОЧЕНЫ ДАВАТЬ КАКИЕ-ЛИБО СОВЕТЫ ИЛИ ЗАЯВЛЯТЬСЯ В ОТНОШЕНИИ ПРОДУКТОВ И УСЛУГ VWR, БЕЗ ПОДТВЕРЖДЕНИЯ VWR В ПИСЬМО.
2.	Технические характеристики — Технические характеристики продукта могут быть изменены без предварительного уведомления.
3.	Доставка — Доставка всех заказов с местной доставкой будет производиться на условиях FCA (INCOTERMS 2010), а доставка всех других заказов будет осуществляться на условиях EXW (INCOTERMS 2010). Сборы за транспортировку и обработку, экспортные, импортные и таможенные сборы, специальные упаковочные материалы (например, голубой лед), дополнительные сборы перевозчика (включая топливные сборы) и сборы за опасные материалы, налагаемые государственным постановлением, оплачиваются Заказчиком, и там, где они были выполнены или оплачены. VWR, оплачивается отдельно в счете VWR.
4.	Поврежденные посылки — Пожалуйста, проверьте посылку VWR при получении. Если обнаружены какие-либо внешние повреждения, принимайте посылку только после того, как водитель отметит повреждение как на своей, так и на вашей копии квитанции о доставке, и вы запросите осмотр у перевозчика. Сохраните все контейнеры и упаковочные материалы для проверки. Если при вскрытии посылки вы обнаружите недостачу или повреждение, вы должны запросить осмотр у перевозчика в течение 48 часов с момента доставки, иначе вы откажетесь от своего права на предъявление претензии.VWR оставляет за собой право отремонтировать поврежденный продукт, если это применимо, до определения замены или кредита.
5.	Условия оплаты — Индивидуальные счета подлежат оплате через тридцать (30) дней с даты выставления счета или согласно иной письменной договоренности; и итоговые счета, если таковые имеются, подлежат оплате по согласованию. Платежи должны производиться в валюте, указанной в счете-фактуре, включая применимые налоги и другие сборы, такие как налагаемые государством дополнительные сборы, которые VWR может потребовать уплатить или собрать в связи с продажей или транспортировкой Продуктов или предоставлением Услуг. .Платеж считается просроченным, если он получен VWR (на почтовый ящик VWR или на указанные банковские счета) после установленного срока, что может привести к дополнительным расходам на обслуживание, как описано далее в этом разделе. С просроченных счетов будет взиматься плата за обслуживание просроченных сумм в размере полутора процентов (1 1/2%) в месяц (или, если меньше, максимальная сумма, разрешенная законом). VWR рекомендует производить платежи банковским переводом, чтобы обеспечить своевременное получение VWR. Клиент будет предоставлять VWR, одновременно с каждым платежом, достаточно подробную информацию о переводе (на уровне счета-фактуры или на уровне строки, в зависимости от случая), чтобы VWR мог правильно применять платежи или кредитовые авизо к непогашенной дебиторской задолженности на VWR. Вспомогательная книга дебиторской задолженности для Клиента.Клиент также должен указывать номер своего счета при любом переводе. Непредоставление VWR такой информации о переводе приведет к дополнительным задержкам обработки и может повлиять на кредитный статус незавершенных или будущих заказов Клиента на покупку. Когда Клиент желает применить одно или несколько кредитовых авизо к сумме платежа, причитающейся VWR, Клиент соглашается предоставить VWR на своевременной основе конкретный номер (а) кредитового авизо (а) и сумму (а), которая будет применяться, в дополнение к денежному переводу. требования к информации выше.Если Клиент не предоставляет такую информацию своевременно, VWR применяет любые такие кредитовые авизо к непогашенной дебиторской задолженности, начиная с самой просроченной дебиторской задолженности. Клиент соглашается заполнить, подписать и подать стандартную заявку на получение кредита VWR в Департамент кредитного контроля VWR. Заказчик предоставит или предоставит VWR по запросу заверенную копию своей последней проаудированной финансовой отчетности (или неаудированной финансовой отчетности, если аудит не проводится). VWR соглашается сохранять конфиденциальность такой информации и использовать ее исключительно для оценки и присвоения кредитного балла или рейтинга Клиенту для продления кредита или незавершенных транзакций.Кроме того, Заказчик соглашается информировать VWR о любых существенных неблагоприятных изменениях в его бизнесе, которые, как можно разумно ожидать (со стороны независимой третьей стороны), негативно повлияют на его невыполненные или будущие платежные обязательства, а также на условия, содержащиеся в настоящем документе. Изменение должно включать в себя, помимо прочего, любое изменение кредитного рейтинга Клиента, определенного любым крупным рейтинговым агентством, включая Standard & Poor’s, Moody’s, Fitch или Dominion Bond Rating Service.
6.	Налог с продаж — Налоги с продаж, если они применимы (местные, государственные или федеральные), будут добавлены к цене счета. Если вы освобождены от налога с продаж, не забудьте предоставить соответствующую документацию при оформлении заказа.
7.	Политика возврата продукта (a) В соответствии с Разделом 8 любой возврат должен быть санкционирован VWR для обеспечения надлежащего кредита и должен быть запрошен в течение 20 дней с момента покупки.ПРИМЕЧАНИЕ: Все возвраты подлежат минимальной комиссии за возврат в размере 15%, и при любой отмене может взиматься плата за отмену. В случае возврата, не вызванного ошибкой VWR, Заказчик несет ответственность за все транспортные расходы и оригинальную упаковку, связанные с возвращенным Продуктом. Для обеспечения надлежащего кредита каждый возврат Продукта должен включать следующую информацию: Имя и адрес клиента Номер заказа на поставку VWR Номер заказа для отгрузки Дата выставления счета Каталожный номер возвращенных товаров VWR Номер разрешения на возврат Причина возврата (b) Товары, возврат которых не разрешен, включают: Товары, не полностью пригодные для перепродажи (включая Товары с поврежденной, отсутствующей или испорченной этикеткой или упаковкой) Химические вещества, реагенты, диагностические средства, стерильные или любые контролируемые продукты (если продукты не соответствуют спецификации) Лабораторное оборудование или инструменты, которые использовались или не имеют оригинальной упаковки, маркировки и руководств по эксплуатации. Продукты, которые не прошли инвентаризацию VWR и не могут быть возвращены производителю. Охлажденные продукты или другие скоропортящиеся продукты Товаров, приобретенных по специальному заказу Продукты, приобретенные не в VWR Продукты с истекшим сроком хранения или слишком коротким сроком годности для перепродажи Продукция, снятая с производства (c) Каждая возвратная партия опасных материалов должна быть упакована и промаркирована в соответствии с применимыми местными правилами, применимыми к транспортировке опасных материалов.Отгрузочные документы также должны соответствовать применимым местным нормам. При необходимости Заказчик должен включать в каждую обратную поставку оборудования подтверждение уполномоченного представителя компании о том, что оборудование было должным образом обеззаражено в соответствии с действующими правилами и другими рекомендуемыми руководящими принципами. Изделие необходимо отправить в указанный сервисный центр с предоплатой транспортных расходов. Для обеспечения быстрой обработки номер разрешения на возврат должен быть размещен на внешней стороне упаковки.
8.	Гарантии на продукцию и услуги и ограничение ответственности (a) VWR гарантирует первоначальному Заказчику, а не третьим лицам, приобретающим такие Продукты и услуги у Заказчика, только следующее: На все программное обеспечение распространяется гарантия в соответствии с лицензионным соглашением поставщика программного обеспечения; все Продукты с фирменными марками и под частными торговыми марками будут соответствовать спецификациям производителя в течение срока, равного гарантийному сроку, указанному в документации производителя Продукта, или шестидесяти (60) дням, в зависимости от того, что больше; и Предоставляемые услуги, если таковые имеются, должны быть указанного вида и качества и выполняться квалифицированным персоналом. (b) УКАЗАННЫЕ ВЫШЕ ГАРАНТИИ В СТАТЬЕ 8 (A) ВЫШЕ ПРЕДОСТАВЛЯЮТСЯ И ПРИНИМАЮТСЯ ВМЕСТЕ, И НАСТОЯЩИМ VWR ОТКАЗЫВАЕТСЯ ОТ ВСЕХ ДРУГИХ ГАРАНТИЙ ИЛИ ГАРАНТИЙ В ОТНОШЕНИИ СООТВЕТСТВИЯ НАСТОЯЩИХ УСЛОВИЙ , ЯВНЫХ ИЛИ ПОДРАЗУМЕВАЕМЫХ, ВКЛЮЧАЯ, БЕЗ ОГРАНИЧЕНИЙ, ЛЮБУЮ ГАРАНТИЮ КОММЕРЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ, ПРИГОДНОСТИ ИЛИ ПРИГОДНОСТИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕННОЙ ЦЕЛИ. ВЫ ПОДТВЕРЖДАЕТЕ, ЧТО ВЫ НЕ ДЕЙСТВУЕТ И ОТКАЗЫВАЕТЕ ОТ ЛЮБЫХ ПРЕТЕНЗИЙ О НАРУШЕНИИ, СВЯЗАННОЙ С ЛЮБЫМИ СОВЕТАМИ, ЗАЯВЛЕНИЯМИ ИЛИ ГАРАНТИЕЙ, КОТОРЫЕ ЯВНО НЕ ИЗЛОЖЕНА ЗДЕСЬ.В частности, БЕЗ ОГРАНИЧЕНИЙ ВЫШЕ, ВЫ ПОДТВЕРЖДАЕТЕ, ЧТО ПРОДУКТЫ НЕ ПРЕДНАЗНАЧЕНЫ ДЛЯ ВАШЕГО КОНКРЕТНОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ИЛИ ЗАКАЗА, И VWR НЕ МОЖЕТ И НЕ ДАЕТ НИКАКИХ ЗАЯВЛЕНИЙ ИЛИ ГАРАНТИИ, ЧТО ПРОДУКТЫ ПОДХОДЯТ ДЛЯ КАКОЙ-ЛИБО ОПРЕДЕЛЕННОЙ ЦЕЛИ. КОМПАНИИ VWR, И ВЫ ПОДТВЕРЖДАЕТЕ, ЧТО НЕ ДЕЙСТВУЕТ НА ТАКИЕ ЗАЯВЛЕНИЯ ИЛИ ГАРАНТИИ. (c) Ответственность VWR по данной ограниченной гарантии не распространяется на какие-либо продукты, которые неправильно используются, изменяются или неправильно используются Заказчиком или любыми другими физическими или юридическими лицами или которые становятся дефектными или несоответствующими в результате действий или бездействия Заказчик или любые другие физические или юридические лица.Дефектный или несоответствующий Продукт определяется только как Продукт, выходящий за рамки определенных производителем спецификаций Продукта, и не должен включать Продукты, которые не соответствуют какой-либо пригодности к использованию Клиентом или каким-либо уникальным условиям эксплуатации или приложениям Клиента. (d) Если какой-либо продукт или услуга, на которые распространяется гарантия по настоящему документу, окажется дефектным или несоответствующим, единственная ответственность VWR и единственное средство правовой защиты Клиента в соответствии с настоящим документом заключаются в том, что VWR отремонтирует или, по выбору VWR, (i) заменит (или повторно выполнит Услугу), бесплатно для Заказчика, любой такой дефектный или несоответствующий Продукт с исправным или соответствующим Продуктом (если применимо) или (ii) кредитовать счет Клиента на все суммы, уплаченные в отношении дефектного или несоответствующего Продукта. или Услуги после получения VWR дефектного или несоответствующего Продукта.В случае замены на замененный Продукт будет действовать оставшаяся часть первоначальной гарантии. (e) Если Продукт требует обслуживания, обратитесь в ближайший к вам офис VWR для получения инструкций (полный список офисов см. В каталоге VWR). Когда возврат Продукта необходим, будет присвоен номер разрешения на возврат, и Продукт будет отправлен с предоплатой транспортных расходов в указанный сервисный центр. Для обеспечения своевременного обращения с Продуктом номер разрешения на возврат должен быть размещен на внешней стороне упаковки, а подробное объяснение дефекта должно быть приложено к Продукту. (f) VWR НИ ПРИ КАКИХ ОБСТОЯТЕЛЬСТВАХ НЕ НЕСЕТ КАКИХ-ЛИБО ОБЯЗАТЕЛЬСТВ ИЛИ ОТВЕТСТВЕННОСТИ ЗА ЛЮБЫЕ ПРИМЕРНЫЕ, КАРАТЕЛЬНЫЕ, СЛУЧАЙНЫЕ, КОСВЕННЫЕ, ОСОБЫЕ ИЛИ КОСВЕННЫЕ УБЫТКИ, ПОТЕРЮ ПРИБЫЛИ, ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ИЛИ доброй воли, ВКЛЮЧАЯ ЗАЯВЛЕНИЕ НА ОСНОВЕ TEG (НА ОСНОВЕ КОНТРАКТА) СТРОГОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬ ИЛИ ЛЮБАЯ ДРУГАЯ ТЕОРИЯ ИЛИ ФОРМА ДЕЙСТВИЙ, ДАЖЕ ЕСЛИ ТАКАЯ СТОРОНА БЫЛА СОВЕТСАНА О ЕГО ВОЗМОЖНОСТИ. ОБЩАЯ ОТВЕТСТВЕННОСТЬ VWR (ВКЛЮЧАЯ ЕЕ СУБПОДРЯДЧИКОВ И АГЕНТОВ) ЗА УБЫТКИ, СВЯЗАННЫЕ С ДАННЫМ СОГЛАШЕНИЕМ, ОГРАНИЧИВАЕТСЯ СУММОЙ, РАВНОЙ СТОИМОСТИ ПРОДУКТА (-ОВ) ИЛИ СБОРА, УПЛАЧЕННОГО ЗА УСЛУГИ, ПОЛУЧАЮЩИЕ ТАКОЕ ПРИБЫЛЬ. ТРЕБОВАТЬ.
9.	Экспортный контроль / борьба с коррупцией — Продукты, приобретенные или полученные по настоящему Соглашению, подпадают под действие законов, ограничений, постановлений и распоряжений экспортного контроля, действующих в Сингапуре. Клиент соглашается соблюдать все применимые экспортные законы, ограничения и постановления Сингапура или иностранных агентств или властей и не будет экспортировать или передавать с целью реэкспорта любой Продукт в любую запрещенную страну или страну, на которую распространяется эмбарго, или в любую запрещенную, заблокированную или обозначенное физическое или юридическое лицо, указанное в любом таком сингапурском или иностранном законе или нормативном акте.Заказчик заявляет и гарантирует, что он не включен в Список запрещенных лиц, лиц с особым назначением или лиц, лишенных права доступа, и ему не запрещается иным образом покупать Продукты или услуги по настоящему Соглашению. Заказчик несет ответственность за получение любой лицензии на экспорт, реэкспорт или импорт, если это потребуется. Заказчик заявляет и гарантирует, что: (а) он ознакомлен и понимает положения Закона США о борьбе с коррупцией за рубежом 1977 года с поправками («Закон США о борьбе с коррупцией») и что Заказчик будет соблюдать U.S. FCPA и все другие применимые законы или нормативные акты по борьбе со взяточничеством или коррупцией любой другой страны или юрисдикции, которые применимы к коммерческой деятельности сторон в соответствии с настоящим Соглашением; (b) ни один руководитель, партнер, должностное лицо, директор или сотрудник Заказчика не является и не станет должностным лицом какого-либо государственного органа любой страны или юрисдикции (кроме США), которые применимы к коммерческой деятельности сторон в соответствии с настоящим Соглашением; и (c) Клиент не предлагал и не должен предлагать, платить, давать или обещать прямо или косвенно (в том числе через третье лицо или посредника) оплату или дар любых денег или ценных вещей государственному чиновнику. , государственный служащий (или служащий любой компании, частично принадлежащей правительству), политическая партия, должностное лицо политической партии или кандидат на любой правительственный или политический пост (каждый, «государственный служащий»), чтобы влиять на любые действия или решения такого правительства. Должностным лицом или побудить такое должностное лицо использовать свое влияние на местное правительство для выполнения или влияния на решение такого правительства, чтобы помочь VWR или Клиенту в выполнении ими своих обязательств по настоящему Соглашению или в интересах другой стороны.Несоблюдение Заказчиком положений данного раздела будет считаться существенным нарушением существенного положения настоящего Соглашения, и VWR будет иметь право немедленно прекратить действие настоящего Соглашения и его исполнения без каких-либо обязательств перед Клиентом.
10.	Собственная информация — Каждая сторона («Получатель») обязуется сохранять конфиденциальность, не раскрывать никакой третьей стороне и не использовать, за исключением конкретной цели выполнения в соответствии с настоящим Соглашением, всю конфиденциальную информацию, предоставленную ей другая сторона («Раскрывающая сторона») или любое Аффилированное лицо Раскрывающей стороны в связи с настоящим Соглашением, или полученные от Раскрывающей стороны или любого Раскрывающего лица во исполнение настоящего Соглашения, и должны возвращать Раскрывающей стороне или Филиалу Раскрывающей стороны, по запросу, все копии ( затем во владении Получателя) документов и других материальных носителей, предоставленных Раскрывающей стороной или такой Аффилированной стороной Раскрывающей стороны или полученных от них, соответственно, в связи с выполнением настоящего Соглашения.Получатель должен проинформировать своих сотрудников, агентов и представителей об этих обязательствах и потребовать от них принятия на себя эквивалентных обязательств.
11.	Разное Прекращение действия — Настоящее Соглашение может быть расторгнуто любой стороной для удобства в любое время после получения разумного письменного уведомления другой стороне. При любом расторжении или истечении срока действия настоящего Соглашения Клиенту должен быть немедленно выставлен счет за Продукты, отправленные до даты вступления в силу такого прекращения или истечения срока действия, и за все пользовательские продукты, приобретенные для Клиента в запасах VWR на эту дату, и Клиент должен оплатить выставленную сумму немедленно после получения такой счет-фактура. Форс-мажор — В случае, если какая-либо из сторон полностью или частично не может выполнить свои обязательства по настоящему Соглашению исключительно в результате форс-мажора, после своевременного направления другой стороне уведомления с подробным описанием такого форс-мажорного события и его предполагаемой продолжительности, обязательства предотвращенной таким образом стороны освобождаются в течение такого периода отсрочки, и такая сторона должна предпринять все разумные шаги, необходимые для устранения последствий такой причины как можно скорее. Слияние, изменение, отказ от прав — Никакие поправки, изменения или отказ от этих условий не являются обязательными для любой из сторон, если они не будут изложены в письменной форме и подписаны уполномоченным должностным лицом стороны, которая должна быть связана, а в случае отказа, будут иметь силу только в конкретном случае и для конкретной цели, для которой они даны, и не должны толковаться как отказ от любого последующего нарушения. Неспособность любой из сторон обеспечить соблюдение в любое время или в течение любого периода времени любого из положений настоящего Соглашения не должно толковаться как отказ от таких положений или от права такой стороны в дальнейшем обеспечивать соблюдение каждого из таких положений.Никакие деловые отношения, торговые операции или действия не должны дополнять, объяснять или изменять какие-либо положения, условия или инструкции настоящего Соглашения или любую поставку Продуктов по настоящему Соглашению. Применимое право и юрисдикция — Настоящее Соглашение составлено в соответствии с законами Сингапура и должно толковаться и применяться исключительно в соответствии с ними, без применения в иных случаях применимых принципов коллизионного права. Стороны подчиняются исключительной юрисдикции судов Сингапура.Конвенция Организации Объединенных Наций о договорах международной купли-продажи товаров прямо не применяется. Полномочия на заключение соглашения — Каждая сторона заявляет и гарантирует, что она уполномочена заключить настоящее Соглашение, и что при этом не нарушаются условия любого контракта или другого соглашения, к которому она может быть вечеринка. Уступка — Настоящее Соглашение имеет обязательную силу и действует в интересах сторон по настоящему Соглашению и их соответствующих правопреемников, а также разрешенных правопреемников и назначенных лиц; при условии, однако, что ни одна из сторон не имеет права передавать, уступать или делегировать свои права или обязанности по настоящему Соглашению или любой его части без предварительного письменного согласия другой стороны (за исключением того, что любая из сторон может передать настоящее Соглашение материнской, дочерней компании или корпорация-правопреемник без такого согласия). Характер взаимоотношений — Ни одна из сторон, ее сотрудники или разрешенные субподрядчики или агенты ни при каких обстоятельствах не могут считаться агентом, партнером, совместным предприятием или представителем другой стороны.

Протокол иммунофлуоресценции с фиксацией формальдегидом

ВАЖНО: Этот протокол рекомендуется как для неконъюгированных, так и для конъюгированных с флуорофором антител.Пожалуйста, обратитесь к разделу Информация об использовании продукта на веб-странице продукта или в техническом описании продукта, чтобы определить, одобрен и одобрен ли этот продукт для использования на культивируемых клеточных линиях (IF-IC) или замороженных срезах тканей (IF-F).

ПРИМЕЧАНИЕ: Некоторые антитела CST ™ оптимально работают при использовании альтернативного протокола. Пожалуйста, ознакомьтесь с протоколом на веб-странице продукта для получения рекомендаций по конкретному продукту.

A. Растворы и реагенты

Получите более качественные иммунофлуоресцентные изображения, используя эффективные и экономичные готовые реагенты из нашего набора прикладных решений для иммунофлуоресценции (№ 12727).

ПРИМЕЧАНИЕ: Приготовьте растворы с использованием деионизированной воды обратного осмоса (RODI) или воды аналогичного качества.

1X фосфатно-солевой буферный раствор (PBS): Чтобы приготовить 1 л 1X PBS, добавьте 100 мл 10-кратного промывочного буфера, фосфатно-солевой буферный раствор (# 12528) к 900 мл dH ₂ O, перемешайте. Отрегулируйте pH до 8,0.
4% формальдегид, без метанола (# 47746): используйте свежий.
Блокирующий буфер: Приобретите готовый к использованию блокирующий буфер иммунофлуоресценции (# 12411) или приготовьте 1X PBS / 5% нормальной сыворотки / 0.3% буфера Triton ™ X-100 путем добавления 0,5 мл нормальной сыворотки того же вида, что и вторичные антитела (например, нормальной козьей сыворотки (# 5425) и 30 мкл Triton ™ X-100 к 9,5 мл 1X PBS. Хранить при 4 ° С.
Буфер для разведения антител: Приобретите готовый к использованию буфер для иммунофлуоресценции антител (№ 12378) или приготовьте буфер 1X PBS / 1% BSA / 0,3% Triton ™ X-100, добавив 0,1 г BSA (№ 9998) и От 30 мкл Triton ™ X-100 до 10 мл 1X PBS. Хранить при 4 ° C.
Вторичное антитело, конъюгированное с флуорохромом: Используйте вторичное антитело, которое реагирует на ваши первичные антитела-хозяева (например,г., кролик). Щелкните здесь, чтобы просмотреть список вторичных антител, одобренных для иммунофлуоресценции.

Б. Фиксация

ПРИМЕЧАНИЕ: Все последующие инкубации следует проводить при комнатной температуре (20-25 ° C), если не указано иное.

Для фиксированной замороженной ткани (IF-F) выполните иммуноокрашивание (раздел C).
Для линий культивированных клеток (IF-IC) или нефиксированных срезов замороженных тканей (IF-F) немедленно исправить, как показано ниже:
1. Покройте образец 4% формальдегида на глубину 2–3 мм.
2. Дайте образцу закрепиться в течение 15 минут при комнатной температуре.
3. Промыть трижды в PBS по 5 минут каждый.
4. Выполните иммуноокрашивание (Раздел C).

C. Иммуноокрашивание

Образец блока в блокирующем буфере на 60 мин.
При блокировании подготовьте первичные антитела в буфере для разведения антител (рекомендуемый диапазон разведения см. На веб-сайте продукта).
Аспират блокирующий раствор, затем нанесите разбавленное первичное антитело.
Инкубируйте в течение ночи при 4 ° C.
Промыть три раза в 1X PBS по 5 минут каждый.

ПРИМЕЧАНИЕ: Если вы используете первичное антитело, конъюгированное с флуорохромом, перейдите к Разделу C, Шаг 8.

Инкубируйте образец в конъюгированном с флуорохромом вторичном антителе, разведенном в буфере для разведения антител, в течение 1-2 часов в защищенном от света месте.
Промыть три раза в 1X PBS по 5 мин в защищенном от света месте.
Подкрашивайте по мере необходимости.

ПРИМЕЧАНИЕ: При включении флуоресцентных клеточных красителей в ваш эксперимент (ДНК-красители и т. Д.), Пожалуйста, обратитесь к странице красителя, чтобы узнать его рекомендуемый протокол. Просмотрите наш список клеточных красителей, утвержденных для использования в иммунофлуоресценции.

Крепление образцов для визуализации.
Для длительного хранения образцы храните при температуре 4 ° C в защищенном от света месте.

, опубликовано в ноябре 2006 г.

пересмотрено в январе 2021 г.

UMass Football одержал первую победу в FBS с 22-14 победами над Akron

Джован Сантос-Нокс из Массачусетса (справа) празднует первую победу своей команды в сезоне в субботу в Акроне, штат Огайо.Фил Мастурзо | Ассошиэйтед Пресс

ПОЛ БАУКЕР

АКРОН, Огайо — Футбольная команда Массачусетского университета 10 недель ждала этого исторического момента. Даже дольше, учитывая двухлетний переход Minutemen в подразделение NCAA Football Bowl.

Когда второкурсник защитника Райан Делер уволил квотербека Акрона Далтона Уильямса менее чем за две минуты до конца субботы, сохранив победу Минитменов 22–14, Делер прыгнул в воздух, размахивая руками, и большинство его товарищей по команде с триумфом спрыгнули с боковой линии.

Официальное празднование наступило через 90 секунд. Главный тренер-первокурсник Чарли Мольнар был облил ведром Gatorade благодаря его игрокам. Тренеры обняли друг друга и торжествующе показали на собравшихся болельщиков UMass, стоящих на трибунах позади скамейки команды. Широкий приемник Бернард Дэвис и защитник Трей Дадли-Джайлз встретили друг друга ударом бедра в воздухе.

«Меня никогда раньше не целовало столько мужчин», — сказал Мольнар, широко улыбаясь после того, как он вышел из раздевалки команды, одержав свою первую победу в качестве тренера.Его награда — игровой мяч, который, по его словам, он будет хранить на полке в своем офисе на территории кампуса.

Первая победа UMass на FBS действительно так много значила для команды, набравшей 63 очка всего за неделю до этого в Северном Иллинойсе. Это была первая победа Minutemen на Среднеамериканской конференции, которая оставила UMass с общим рекордом 1-9, 1-5 MAC, вступив в игру в следующую субботу против Buffalo на стадионе Gillette в Фоксборо.

«Нам нужно продолжать строительство», — сказал защитник-первокурсник Майк Вегзин, выполнивший 23 паса из 39 на 266 ярдов.«Обязательно возьми это, развивай и одержи вторую победу».

Вегзин выполнил свой первый пас тачдаун в пяти играх, а также забил в прыжке на 1 ярд. Пантер Колтер Джонсон, которого Молнар называет лучшим игроком в MAC и одним из лучших в стране, дважды во втором тайме прижал Акрона к его собственной 1-ярдовой линии. Кикер-первокурсник Блейк Лукас забил три высоких в карьере мяча с игры на дистанции от 23 до 35 ярдов плюс дополнительный удар. Тайт-энд Роб Бланчфлауэр поймал рекордные в карьере шесть передач на 64 ярда.

Но настоящим переломным моментом стала защита «Минитменов» во главе с новичком из Норвуда. Джо Колтон заблокировал мяч в первой четверти, что привело к первому голу с игры Лукаса. У него также был один из четырех перехватов UMass.

«Активно участвовать в игре и менять темп — это в любом случае здорово, но когда дело касается специальных команд, по какой-то причине специальные команды — это часть футбола, которая просто меняет игру», — сказал Колтон. «Когда мы так поступаем, когда мы даем возможность нашему нападавшему оказаться внутри 10, может быть, внутри пятерки, мы просто знали, что помогаем нашей команде.«

Блок Колтона дал UMass мяч на Akron 5. Хотя Minutemen не смог пройти 1, Лукас вывел UMass на первое место 3-0, забив 23 ярда с игры.

Блокированный пант начал серию ударов с игры. UMass играет большую роль в защите. Два из следующих трех владений Акрона были остановлены перехватами. Впервые в этом сезоне Minutemen не смогли забить своего соперника в первом тайме, выстроив отрыв 15-0 после трех ударов Лукаса и 24 — результативный пас от Вегзина к Алану Уильямсу (шесть уловов, 86 ярдов).

Помимо Колтона, перехватывали Рэндалл Джетт, Эд Сен-Виль и Хари Бейли-Смит. Игрок Акрона Далтон Уильямс, ведущий защитник MAC, сделал 34 из 51 передач на 332 ярда, но защитный натиск Минитменов вынудил его совершить четыре передачи и несколько поспешных передач. Однажды его уволили. Минитмены также заставили четыре нащупывания.

«Это действительно уверенная в себе группа парней, и я думаю, что уверенность действительно начинает проявляться», — сказал Мольнар. «Во многом все сводится к тому, что наши парни просто бьют сильнее, чем те, против которых мы играем.Сегодня это действительно проявилось ».

В конце концов, Делер нанес серьезный удар, чтобы прикончить« Зипс ». 19-метровый тачдаун-пас от Уильямса к Маркело Суэлю за 2:27 до конца игры вытащил Акрона на расстояние удара. За 1:50 до конца игры «Зипс» снова был в руках.Но на четвертом и втором на «Акрон-49» Делер с грохотом бросился на Уильямса, уволил его и вызвал провал в концовке игры, который был восстановлен Кевином Бирном из UMass.

«Так как мы играли в защите, я знал, что кто-то собирается выступить и сыграть», — сказал Мольнар.

Часто задаваемые вопросы

ОБЩЕЕ

Чем продукты Symansis отличаются от продуктов других поставщиков?
Смогут ли антитела, продуцируемые против цитокинов, экспрессируемых E. coli, распознавать цитокин, экспрессируемый человеком Symansis?
Что такое слитые белки Fc и почему они используются?
Как создаются 2D-денситометрические изображения?

ВОССТАНОВЛЕНИЕ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ

Какой буфер ресуспендирования мне следует использовать?
Каковы рекомендуемые условия хранения для поддержания оптимальной долгосрочной биологической активности?
Все ли продукты поставляются стерильными?
Содержит ли продукт носитель или другие добавки?

СТРУКТУРА САХАРА

В чем разница между теоретической молекулярной массой и наблюдаемой молекулярной массой?
В чем разница между теоретическим и наблюдаемым pI?
Почему на геле 2D видно несколько пятен для моего белка?
Почему молекулярная масса белка изменяется после обработки PNGase F?
Как узнать, что в белке есть N-связанные гликаны?
Какой коктейль гликозидазы используется?
Почему наблюдаемый диапазон молекулярной массы не является точным значением?
Почему полоса одномерного геля широкая?
Почему используется коктейль с гликозидазой?
Как узнать, что в белке есть О-связанные гликаны?

ELISA

В чем преимущество стандартов ELISA, экспрессируемых человеческими клетками компании Symansis?
Должен ли я анализировать все мои стандарты и образцы в двух экземплярах?
Должен ли я запускать все мои образцы одновременно?
Какие воспроизводимые результаты получаются с помощью анализов?
Какие условия хранения необходимы для набора или продукта?
Можно ли хранить реагенты, отличные от указанных?
Как мне хранить образцы?
Сколько образцов будет работать в каждом комплекте?
Могу ли я изменить протокол?
Должен ли я каждый раз запускать пустой или нулевой стандарт?
Могу ли я изменить объем образца, который я использую в анализе?
Что делать, если объема реагента недостаточно?
Можно ли использовать компоненты из разных наборов?
Могу ли я хранить разбавленные стандарты и использовать их снова?
Могу ли я составить свою собственную стандартную кривую?
Как вы рекомендуете мыть тарелку?
Нужно ли мне использовать шейкер для тарелок?
Могу ли я использовать орбитальный шейкер для колб вместо шейкера для планшетов?
Почему мне нужно использовать коррекцию длины волны в диапазоне 450-570 нм?
Если я возьму образец, нужно ли мне соблюдать рекомендованные разведения, указанные во вкладыше к набору?
Какую ожидаемую концентрацию аналита я должен ожидать найти?
Мои оптические плотности были немного выше (или ниже), чем те, которые указаны во вкладыше в упаковке, который прилагался к моему комплекту.Почему?
Можно ли заменить альбумин бычьей сыворотки (BSA) другими вещами, такими как эмбриональная бычья сыворотка (FBS), в буферах для ELISA?
Мои образцы находятся в среде для культивирования тканей; мне нужно разбавить мои стандарты в той же среде?
Как долго я могу хранить планшеты, покрытые улавливающими антителами?
Каковы причины высокого фона?
Каковы причины неправильных стандартных кривых?
Каковы причины отсутствия развития цвета?
Каковы причины высокого коэффициента вариации внутри анализа (CV) (вариации данных)?
Когда более целесообразно использовать хемилюминесцентный иммуноанализ вместо ELISA?
Что делать, если я не получаю хороших результатов или испытываю трудности?
Почему продукты Symansis являются более чувствительными стандартами в количественных иммуноанализах с участием нативных белков человека?

ОБЩЕЕ

Чем продукты Symansis отличаются от продуктов других поставщиков?
Продукты Symansis экспрессируются из клеток человека, а не из E.coli, CHO или клетки насекомых. Экспрессия в человеческих клетках способствует посттрансляционным модификациям (PTM), таким как фосфорилирование и гликозилирование пептидного остова. PTM могут влиять на стабильность белка, белок-белковые взаимодействия, укладку белка и антигенность. Не относящиеся к человеку экспрессирующие системы не добавляют определенные PTM и могут неправильно добавлять другие PTM (например, известно, что клетки насекомых чрезмерно гликозилируют экзогенно экспрессируемые белки). Экспрессия человеческих цитокинов из человеческих клеток гарантирует, что белки будут более точно имитировать встречающиеся в природе цитокины.Для получения дополнительной информации в этой области посетите страницы нашего центра ресурсов.

Верх

Смогут ли антитела, вырабатываемые против цитокинов, экспрессируемых E. coli, распознавать цитокин, экспрессируемый человеком Symansis?
Цитокины Symansis отличаются от цитокинов наших конкурентов, потому что цитокины экспрессируются из клеток человека. Это означает, что цитокины имеют человеческие посттрансляционные модификации, такие как гликозилирование. Возможно, сайты связывания антител могут быть замаскированы гликопротеинами.Гликозилирование может также способствовать сворачиванию белка в более стабильное состояние, интернализируя сайты связывания антител (для антител, полученных против цитокинов, экспрессируемых E. coli). Рекомбинантная экспрессия цитокинов человека из клеток NSO, CHO или насекомых (например, клеток Sf21) также способствует гликозилированию, но эти системы экспрессии могут добавлять гликановые структуры, которые отличаются от встречающихся в природе цитокинов. Предполагается, что цитокины, экспрессируемые человеком Symansis, будут вести себя иначе, чем цитокины, экспрессируемые с использованием других систем экспрессии, таких как E.coli или CHO. Наблюдаемое точное различие будет зависеть от того, является ли антитело моноклональным или поликлональным, а также от эпитопа, который распознает антитело. Несмотря на это, считается, что поведение цитокинов Symansis более близко имитирует природные цитокины человека.

Верх

Что такое слитые белки Fc и почему они используются?
Цитокины и особенно внеклеточные домены рецепторов цитокинов могут быть экспрессированы как слитые белки Fc.Область Fc включает шарнирную область и домены Ch3 и Ch4 человеческого IgG1. Домен Fc облегчает димеризацию гибридного белка за счет образования дисульфидных связей. Это, в свою очередь, значительно увеличит нейтрализующую способность белка по сравнению с мономерными рецепторными формами. Кроме того, известно, что слитые белки Fc демонстрируют увеличенный период полужизни in vivo. Экспрессия слитого белка Fc может увеличивать аффинность связывания определенных рецепторов по сравнению с аффинностью растворимого мономера.Это обеспечивает димеру рецептор-Fc ряд преимуществ по сравнению с соответствующими эквивалентами мономерного рецептора (например, растворимыми мономерами рецептора интерлейкина). Преимущества включают увеличенный период полужизни белка, повышенную аффинность связывания лиганда и минимизацию естественных мембраносвязанных рецепторных комплексов.

Верх

Как создаются 2D-денситометрические изображения?
Продукт Symansis фокусировали на полосе IPG с градиентом pH 3-10, а затем запускали в геле SDS-PAGE с линейным градиентом вместе с набором маркеров молекулярной массы.Гель окрашивали с использованием белковых красителей Deep Purple или Coomassie Blue. Относительные интенсивности пятен белков, видимых на 2D-геле, анализировали с помощью программного обеспечения ImageJ (http://rsb.info.nih.gov/ij/). Денситометрический анализ проводился на пятнах в пределах выбранной области геля, и вычитание фона проводилось с использованием соответствующей пустой области геля (области без пятен белка). Интегрирование объема выполняли для каждого интересующего пятна белка, и исходя из этого рассчитывали центр масс и его относительную процентную интенсивность.Молекулярные массы и значения pI соответствующих пятен определяли путем сравнения их с положением прецизионных маркеров MW и линейной полоски IGP. Первые были приспособлены к экспоненциальной функции с полиномом 4-го порядка для точной интерполяции положений белковых пятен между положениями маркеров MW. Каждое белковое пятно соответствует уникальной изоформе продукта Symansis.

Верх

ВОССТАНОВЛЕНИЕ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ

Какой буфер ресуспендирования мне следует использовать?
Мы рекомендуем ресуспендировать каждый лиофилизированный цитокин в 500 мкл 1 x стерильного PBS.Если цитокин должен храниться в течение длительного периода времени, мы рекомендуем концентрацию не менее 100 мкг / мл.

Верх

Каковы рекомендуемые условия хранения для поддержания оптимальной долгосрочной биологической активности?
Наши продукты лиофилизированы для обеспечения стабильности в широком диапазоне температур. Однако мы рекомендуем длительное хранение лиофилизированных продуктов при -20oC. После ресуспендирования цитокинов мы рекомендуем кратковременное хранение при 2-8 ° C.Для более длительного хранения мы рекомендуем аликвотировать раствор в одноразовые флаконы (чтобы избежать повторяющихся циклов замораживания-оттаивания) и хранить флаконы при -20 ° C или -80 ° C

Top

Все ли продукты поставляются стерильными?
Все продукты поставляются стерильными и подходят для использования в культуре тканей или других стерильных средах.

Верх

Содержит ли продукт носитель или другие добавки?
Цитокины Symansis состоят из белков-носителей для повышения стабильности продукта.По запросу мы также предлагаем цитокины, не содержащие носителей. Если вы заинтересованы в приобретении цитокинов, не содержащих носителей, отправьте электронное письмо [защищено по электронной почте], указав, какие цитокины вы заинтересованы в приобретении без носителей и в каком количестве. Мы свяжемся с вами, чтобы доставить вам товар в кратчайшие сроки.

Верх

СТРУКТУРА САХАРА

В чем разница между теоретической молекулярной массой и наблюдаемой молекулярной массой?
Теоретическая молекулярная масса рассчитывается на основе аминокислотной последовательности зрелого белка.Теоретическая молекулярная масса учитывает только остов белка после удаления сигнального пептида и любых пропептидов, он не включает какие-либо посттрансляционные модификации (PTM), которые могли произойти во время продукции белка. Большинство PTM не вносят значительного вклада в молекулярную массу (MW) всего белка. Например, фосфатная группа имеет молекулярную массу 80 Да, а ацетилирование добавляет 40 Да. Исключениями являются гликозилирование, липидирование и добавление убиквитина.Поскольку все продукты Symansis растворимы, липидирование и добавление убиквитина можно не учитывать. Белки симансиса экспрессируются из клеток человека, облегчая добавление олигосахаридов (гликанов) к основному белку. Присоединение гликанов к основной цепи белка увеличивает наблюдаемую молекулярную массу по сравнению с теоретической молекулярной массой. Большинство N-связанных гликановых структур имеют молекулярную массу более 2 кДа. Если в белке есть 3 занятых сайта N-гликана, молекулярная масса белка может быть увеличена более чем на 6-10 кДа.Таким образом, разницу между теоретической молекулярной массой и наблюдаемой молекулярной массой можно использовать для получения расчетного процента гликозилирования цитокина.

Верх

В чем разница между теоретическим и наблюдаемым pI?
Теоретическая pI обычно рассчитывается на основе аминокислотной последовательности зрелого белка. Наблюдаемая pI отличается из-за посттрансляционных модификаций (PTM), включая фосфорилирование и сиалирование.Например, теоретическая pI IL-10 составляет приблизительно 7,9. Когда фосфатная группа добавляется к остатку серина или треонина, теоретический pI изменяется до 7,1. * pI рассчитаны с использованием ProMOST (http://proteomics.mcw.edu/promost/)

Top

Почему на геле 2D видно несколько пятен для моего белка?
Множественные пятна возникают из-за различных изоформ белков, возникающих в результате посттрансляционных модификаций (PTM) и / или протеолитического процессинга. Это не из-за примесей белка.

Верх

Почему молекулярная масса белка изменяется после обработки PNGase F?
N-связанные гликаны удаляются обработкой PNGase F. Снижение молекулярной массы показывает, что белок N-гликозилирован.

Верх

Как узнать, что в белке есть N-связанные гликаны?
Падение молекулярной массы после обработки PNGase F означает присутствие N-связанных гликанов.

Верх

Какой коктейль гликозидаз используется?
Коктейль гликозидаз, используемый для удаления N-связанных и O-связанных гликанов, состоит из PNGase F, сиалидазы A (нейраминидазы), O-гликаназы, бета-1,4-галактозидазы и бета-N-ацетилглюкозаминидазы.Образец инкубировали в смеси ферментов при 37 ° C в течение 3 часов.

Верх

Почему наблюдаемый диапазон молекулярной массы не является точным значением?
Белки с посттрансляционными модификациями, в частности гликозилированием, отображаются в виде широких полос на SDS-PAGE. Заявленная наблюдаемая молекулярная масса измеряется в геле SDS-PAGE, калиброванном по стандартам молекулярной массы.

Верх

Почему полоса одномерного геля широкая?
Белки с посттрансляционными модификациями, в частности гликозилированием, появляются в виде широких полос на SDS-PAGE из-за присутствия различных изоформ и гликоформ.

Верх

Почему используется коктейль гликозидаз?
Нет фермента для удаления всех O-связанных гликанов. Фермент O-гликаназа удаляет только простые O-связанные гликаны. Добавление к смеси других гликозидаз гарантирует, что любые удлиненные О-связанные гликаны будут сокращены до простых структур, которые может удалить О-гликаназа.

Верх

Как узнать, что в белке есть О-связанные гликаны?
Снижение молекулярной массы после обработки коктейлем гликозидаз означает присутствие N-связанных и / или O-связанных гликанов.Если наблюдаемая молекулярная масса белка, обработанного коктейлем гликозидаз, ниже, чем наблюдаемая молекулярная масса белка, обработанного PNGase F, то белок является О-гликозилированным.

Верх

ELISA

В чем преимущество стандартов ELISA, экспрессируемых человеческими клетками Symansis?
Они более точно коррелируют с уровнями цитокинов в человеческой сыворотке или супернатантах клеточных культур, полученных из человеческих клеток.

Верх

Должен ли я анализировать все мои стандарты и образцы в двух экземплярах?
Да, дубликаты запускаются для контроля точности анализа и повышения уверенности в полученных результатах.

Верх

Должен ли я запускать все образцы одновременно?
Нет, в каждый набор входят отдельные флаконы с каждым компонентом, которые можно разделить на аликвоты и хранить. Это позволяет пользователю анализировать разное количество образцов в разное время, покрывая только необходимое количество лунок микротитрационного планшета захватывающим антителом.

Верх

Какие воспроизводимые результаты получаются с помощью анализов?
К каждому комплекту прилагается вкладыш пакета, содержащий график типичных полученных данных.Эти данные будут варьироваться в зависимости от времени и температуры инкубации. Однако полосы ошибок на графике указывают на типичные ошибки, полученные в повторяющихся точках данных.

Верх

Какие условия хранения необходимы для набора или продукта?
Температура хранения каждого набора указана на этикетке. После восстановления компонентов набора водой или буфером, указанным во вкладыше к упаковке, их следует хранить замороженными при температуре от -20 ° C до -80 ° C небольшими аликвотами, чтобы исключить необходимость в многократных циклах замораживания / оттаивания.

Верх

Можно ли хранить реагенты, отличные от указанных?
Хранение компонентов набора в условиях, отличных от указанных, не рекомендуется для обеспечения надлежащего выполнения теста.

Верх

Как хранить образцы?
Образцы следует хранить при температуре -20 ° C или ниже. Для длительного хранения рекомендуется заморозить их при -70oC -80oC.

Верх

Сколько образцов будет работать в каждом комплекте?
Каждый набор обеспечивает достаточное количество реагентов для запуска не менее пятнадцати 96-луночных микротитрационных планшетов с 36 образцами в двух экземплярах, в зависимости от количества стандартов, используемых для калибровочной кривой.

Верх

Могу ли я изменить протокол?
Комплекты Symansis были оптимизированы для обеспечения наилучших результатов. Изменение формата или протокола может дать результаты, отличные от тех, которые показаны на вкладыше к пакету.

Верх

Должен ли я каждый раз запускать пустой или нулевой стандарт?
Да, они необходимы для расчетов и отражают любые незначительные, но существенные изменения производительности день ото дня и от анализа к анализу.Они также чрезвычайно полезны при устранении источника конкретной проблемы анализа.

Верх

Могу ли я изменить объем образца, который я использую в анализе?
Не рекомендуется изменять тома, так как все комплекты Symansis предназначены для оптимальной производительности при данных томах

Top

Что делать, если объема реагента недостаточно?
В случае небольших объемов реагентов, таких как аликвоты реагентов, центрифугируйте флаконы перед использованием, чтобы собрать все содержимое на дне флакона.

Верх

Можно ли использовать компоненты из разных наборов?
Каждый набор содержит компоненты с определенными номерами партий, чтобы гарантировать оптимальную работу всех компонентов в одиночку, а также со всеми другими компонентами в комплекте. Для этих конкретных партий проводится тестирование контроля качества. Никогда не рекомендуется использовать собственные компоненты или компоненты других комплектов или поставщиков.

Верх

Могу ли я сохранить разбавленные стандарты и использовать их снова?
Нет, мы рекомендуем использовать разбавленные стандарты в течение времени, необходимого для проведения анализа (обычно один день).

Верх

Могу ли я составить собственную стандартную кривую?
Да, вы создаете свою собственную стандартную кривую, разбавляя предоставленный стандарт в соответствии с рекомендуемым диапазоном набора во вкладыше к упаковке.

Верх

Как вы рекомендуете мыть тарелку?
Если вы используете автоматическую машину для промывки планшетов, мы рекомендуем регулярно проверять калибровку и промывать систему буфером для промывки планшетов перед промывкой.То же самое и с ручной стиральной машиной. Также можно использовать повторитель или промывочную бутылку. Пользователь должен быть осторожен, чтобы убедиться, что все содержимое аспирировано, а пластина постукивается насухо на безворсовой бумаге.

Верх

Нужно ли мне использовать шейкер для тарелок?
Надежные результаты можно получить без встряхивателя для планшетов, но внешний диаметр обычно будет ниже, чем при использовании встряхивателя для планшетов.

Верх

Могу ли я использовать орбитальный шейкер для колб вместо шейкера для планшетов?
Орбитальный шейкер для колб может использоваться, если микротитровальный планшет надежно закреплен, а шейкер установлен на достаточно низкую скорость, чтобы гарантировать, что содержимое лунок не выталкивается.

Верх

Почему мне нужно использовать коррекцию длины волны в диапазоне 450-570 нм?
Для анализа ELISA выполняется считывание на двух длинах волн для корректировки оптической плотности, вносимой пластиковой лункой, лампой и оптическими флуктуациями.

Верх

Если я извлечу образец, нужно ли мне соблюдать рекомендованные разведения, указанные во вкладыше к набору?
Количество разбавления образца, необходимое после процедуры экстракции, будет зависеть от эффектов очистки и концентрации в используемом протоколе.Количество разбавления или концентрации должно определяться конечным пользователем.

Верх

Какую ожидаемую концентрацию аналита я должен ожидать найти?
Количество данного аналита может варьироваться не только от вида к виду, но также от тканевых и клеточных источников. Лучшим источником этой информации является текущая литература, к которой можно легко получить доступ через Интернет в многочисленных научных базах данных.

Верх

Мои оптические плотности были немного выше (или ниже), чем те, которые указаны во вкладыше в упаковке, поставляемом с моим комплектом.Почему?
На оптическую плотность влияет ряд физических условий, таких как время и температура. Мы предлагаем сократить или удлинить окончательную инкубацию с раствором субстрата для компенсации.

Верх

Можно ли заменить альбумин бычьей сыворотки (BSA) другими вещами, такими как эмбриональная бычья сыворотка (FBS), в буферах для ELISA?
Да, 1% BSA можно заменить 10% FBS для блокировки планшета. Разведение стандарта, образцов сыворотки и детектирующих антител в буферах, содержащих 10% FBS, может быть предпочтительным для тестирования образцов сыворотки или жидкостей тканевых культур.

Верх

Мои образцы находятся в среде для культивирования тканей; мне нужно разбавить мои стандарты в той же среде?
Да, если вы не хотите разбавлять среду для культивирования тканей аналитическим буфером. Ваши стандарты должны быть разбавлены примерно той же средой, что и ваши образцы. Однако использование среды в качестве разбавителя может привести к понижению вашей стандартной кривой по сравнению с графиком, изображенным во вкладыше к упаковке, который вы получили в своем наборе.

Верх

Как долго я могу хранить планшеты, покрытые улавливающими антителами?
Планшеты для ELISA, которые уже были покрыты захватывающим антителом, можно хранить при 4 ° C не более 3 дней.Во время хранения планшеты должны быть герметично закрыты и содержать блокирующий буфер или буфер для анализа (например, 1% BSA в PBS или 10% FBS в PBS).

Верх

Каковы причины высокого фона?
Неправильная стирка: недостаточная стирка или пропуск одного из этапов стирки может привести к высокому фону. Проверьте объем резервуара промывочного буфера и убедитесь, что выполнены все рекомендуемые этапы промывки. Загрязненный субстрат: перед использованием убедитесь, что субстрат не загрязнен ионами металлов или окисляющими реагентами.Храните дополнительный раствор субстрата отдельно во время разработки субстрата ELISA. Раствор субстрата не должен сам по себе окраситься в течение этого времени. Загрязненный разбавитель: большинство разбавителей для анализа основаны на белковой матрице, которая может привести к росту микробов. Для удаления необходимого разбавителя из контейнера для хранения используйте только стерильные пипетки. Подверженный свету субстрат: Воздействие света может привести к синему цвету субстрата. Храните растворы в темноте (флакон) до тех пор, пока они не будут разливаться в тарелку.Неправильное разведение конъюгата: убедитесь, что конъюгат разводится в соответствии с инструкциями в вкладыше к упаковке. Слишком высокая концентрация конъюгата может привести к повышению фона. Неправильное время / температура инкубации: Как правило, следуйте протоколу теста в отношении времени и температуры инкубации. Однако, если все лунки интенсивно и одинаково окрашены без градиента интенсивности, наблюдаемого в серии стандартных разведений, то может быть необходимо наблюдать за реакцией субстрата по мере появления цвета, чтобы остановить реакцию раньше.

Верх

Каковы причины неправильных стандартных кривых?
Неправильный объем восстановления лиофилизированного стандарта: убедитесь, что лиофилизированный порошок восстанавливается в правильном объеме и в правильном буфере (деионизированная или дистиллированная вода с 0,05% NaN3). Буфер для восстановления и объем указаны во вкладыше к упаковке. Слишком короткое время восстановления: убедитесь, что процесс восстановления длится достаточно времени для полной солюбилизации лиофилизированного порошка.Неправильное разведение концентрированного исходного стандарта: убедитесь, что предоставленный концентрированный исходный стандарт был разбавлен в соответствии с диапазоном, указанным во вкладыше к упаковке. Неправильное хранение исходного материала: Условия хранения исходного стандартного раствора указаны во вкладыше к упаковке. Точно следуйте этим рекомендациям. Загрязнение стандарта: следует избегать загрязнения стандарта за счет использования стерильных пипеток и надлежащего хранения. Неправильное перемешивание на этапах стандартного разбавления: при приготовлении серийных разбавлений концентрированного стандарта убедитесь, что на каждом этапе каждого разбавления происходит правильное перемешивание.Неправильная длина волны измерения: убедитесь, что используемый планшет-ридер настроен на правильную длину волны. Пожалуйста, проверьте эталонную длину волны. Используемый стандарт из другой партии: для проведения анализа используйте только стандарт из того же набора. Не заменяйте стандарт из другого комплекта.

Верх

Каковы причины отсутствия проявления цвета?
Реагенты не при комнатной температуре в начале тестирования: перед проведением теста доведите все реагенты до комнатной температуры.Неправильное хранение отдельных реагентов: Условия хранения всех компонентов набора указаны во вкладыше к упаковке. Следуйте этим рекомендациям. Загрязнение конъюгата HRP: перед использованием убедитесь, что субстрат не загрязнен. Неправильное разведение конъюгата HRP: если концентрированный конъюгат разбавить до слишком низкой концентрации, цвет будет слабым. Следуйте инструкциям на вкладыше тестового пакета. Двухкомпонентный ТМБ смешан неправильно: при использовании двухкомпонентной смеси субстрата ТМБ соблюдайте соотношение смеси для субстрата ТМБ, указанное поставщиком.Перед использованием убедитесь, что компоненты перемешаны должным образом. Пропуск любого этапа инкубации: убедитесь, что все этапы протокола теста выполнены. Микролунки высохли после мытья или во время хранения: после мытья постучите микротитровальными пластинами по впитывающей подушечке или бумажному полотенцу, чтобы удалить излишки промывочного буфера. Используйте микротитровальные планшеты сразу после мытья или поместите их вверх дном на влажную впитывающую бумагу не более чем на 15 минут. Не допускайте высыхания колодцев. Покрытие удаляется царапинами во время промывки / пипетирования: будьте осторожны, чтобы не поцарапать внутреннюю поверхность микролунок при мытье планшета или пипетировании стандартов и образцов.Образцы не подходят или слишком разбавлены для теста: убедитесь, что образцы подходят (например, совместимы с тестовыми буферами) для условий теста или анализа и что они не были чрезмерно разбавлены.

Верх

Каковы причины высокого коэффициента вариации внутри анализа (CV) (вариации данных)?
Покрытие удаляется царапинами во время промывки / пипетирования: будьте осторожны, чтобы не поцарапать внутреннюю поверхность микролунок при мытье планшета или пипетировании стандартов и образцов.Перекрестное загрязнение от лунки к лунке путем снятия крышки планшета: осторожно снимите крышку планшета после инкубации, чтобы избежать перекрестного заражения из одной лунки в другую. Неоднородные образцы: убедитесь, что образцы, которые вы используете для теста, однородны. Смешайте их перед добавлением в планшет, чтобы избежать градиентов, вызванных замораживанием / оттаиванием. Краевой эффект: закройте планшет во время инкубации и, если возможно, инкубируйте на шейкере. Используемые дозаторы не откалиброваны должным образом. Убедитесь, что используемые дозаторы правильно откалиброваны.

Верх

Когда более целесообразно использовать хемилюминесцентный иммуноанализ вместо ELISA?
Хемилюминесцентный иммуноанализ — это более чувствительный анализ, который обычно используется только тогда, когда образцы содержат очень низкие концентрации аналита, которые ниже уровней обнаружения ELISA.

Верх

Что делать, если я не получаю хороших результатов или испытываю трудности?
Свяжитесь с нами (или напишите по электронной почте [адрес электронной почты защищен]), чтобы получить техническую поддержку.

Верх

Почему продукты Symansis являются более чувствительными стандартами в количественных иммуноанализах с участием нативных белков человека?
Цитокины Symansis экспрессируются из клеток человека и имеют посттрансляционные модификации, имитирующие природные цитокины человека. Количественные иммуноанализы, такие как ELISA, используют антитела, направленные против интересующего цитокина, для количественного определения образца. Если антитело было продуцировано против цитокина, экспрессированного из клеток E. coli или CHO, антитело может распознавать область, которая обычно гликозилирована, которая обычно интернализуется, когда белок правильно свернут.В результате могут возникнуть неточности при использовании стандартов, экспрессируемых нечеловеческими клетками (например, экспрессированных из E. coli) для количественного определения естественного человеческого белка. Стандарты, экспрессируемые нечеловеческими клетками, могут переоценить природный цитокин, если антигенные эпитопы отсутствуют на стандартном белке из-за отсутствия специфических для человека посттрансляционных модификаций. И наоборот, стандарты, экспрессируемые нечеловеческими клетками, могут недооценивать природный цитокин, если антитело направлено на область, которая обычно не экспонируется на природном человеческом белке.Symansis поставляет наборы для ELISA с цитокинами, экспрессируемыми в клетках человека, чтобы облегчить построение стандартных кривых, которые более точно определяют количество встречающихся в природе цитокинов.

Лизат тромбоцитов как замена фетальной бычьей сыворотки в культурах мезенхимальных стромальных клеток — FullText — Transfusion Medicine and Hemotherapy 2013, Vol. 40, № 5

Абстрактные

Мезенхимальные стромальные клетки (МСК) оказались очень привлекательными в регенеративной медицине на основе клеток.Первоначально предполагалось предоставить клетки, способные дифференцироваться в типы мезенхимальных клеток (остеобласты, хондроциты, адипоциты и т. Д.), Благодаря мощным иммунорегуляторным и прорегенеративным действиям, которые были обнаружены, расширяя область потенциальных применений от регенерации костей и хрящей до заживления ран. и лечение аутоиммунных заболеваний. Из-за ограниченной частоты в большинстве тканевых источников экспансия МСК ex vivo требуется в соответствии с руководящими принципами надлежащей производственной практики (GMP) для получения клинически значимых доз клеток.Тем не менее, по-прежнему в большинстве производственных протоколов используется фетальная бычья сыворотка (FBS) в качестве добавки к культуре клеток для выделения и увеличения MSC. Однако высокая изменчивость от партии к партии, а также риск заражения и иммунизации требуют условий культивирования, свободных от ксеногенов. С точки зрения стандартизации, химически определенные среды выглядят как высшее достижение. Так как эти среды должны поддерживать все ключевые клеточные и терапевтические свойства МСК, разработка химически определенных сред все еще — хотя и тщательно изучена — только в самом начале.Существующие альтернативы FBS основаны на компонентах крови человека: плазме, сыворотке, сыворотке пуповинной крови и производных тромбоцитов, таких как лизат тромбоцитов. Сосредоточившись на аспектах качества, последние будут рассмотрены в данном обзоре.

Тромбоцитарные факторы для клеточной культуры и регенерации тканей

Для клеточной культуры ex vivo / in vitro требуется базальная среда плюс добавки, содержащие факторы роста, белки и ферменты для поддержки прикрепления, роста и пролиферации.Фетальная бычья сыворотка (FBS) обычно используется в качестве дополнения к средам для культивирования клеток, поскольку среда плода обогащена факторами роста по сравнению с ситуацией взрослого человека и бедна антителами [1]. В отличие от плазмы, сыворотка содержит множество факторов роста, цитокинов и хемокинов, которые образуются во время свертывания крови и высвобождаются физиологически активированными тромбоцитами [2]. Помимо остановки кровотечения, эти факторы способствуют закрытию и заживлению раны. Исследования 1980-х годов определили стимулирующие рост эффекты лизата тромбоцитов человека (HPL) на различные клеточные линии [3], опухолевые клетки [4] и суставные хондроциты [5].В частности, факторы, происходящие из α-гранул, такие как фактор роста тромбоцитов (PDGF), трансформирующий фактор роста β (TGF-β), инсулиноподобный фактор роста (IGF), фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), фактор роста фибробластов. (FGF-2 / bFGF), фактор роста гепатоцитов (HGF) и эпидермальный фактор роста (EGF) были идентифицированы как клеточные митогены, обладающие способностью к заживлению ран [6,7,8]. В сочетании с молекулами внеклеточного матрикса факторы тромбоцитов, например TGF-β1, обеспечивают остеоиндуктивную способность остеобластов [6] (рис.1). Чтобы использовать эти физиологические функции, факторы, полученные из тромбоцитов, применялись в качестве терапевтических агентов для заживления ран и регенерации костей. Чтобы сконцентрировать факторы, была разработана плазма, обогащенная тромбоцитами (PRP). Это происходит путем центрифугирования цельной крови с антикоагулянтом, в результате чего получают плазму, обогащенную тромбоцитами. Дальнейшее концентрирование может быть достигнуто на втором этапе центрифугирования [6,9]. Последующая коагуляция с кальцием образует гель фибрина, который в сочетании с высвобождаемыми тромбоцитами факторами роста служит терапевтическим средством при пластической хирургии, ортопедических вмешательствах, заживлении хронических ран, офтальмологии и т. Д.[6,9,10,11,12,13]. Несмотря на многочисленные вмешательства, доказательства эффективности применения PRP остаются противоречивыми: Sommeling et al. [10] сообщили о значительном улучшении по нескольким показаниям, включая заживление ран, а также пересадку жира и костей, тогда как Martinez-Zapata et al. [13] не обнаружили доказательств пользы PRP при лечении хронических ран, подобных Sheth et al. [12], которые заявляют, что «текущая литература осложняется отсутствием стандартизации протоколов исследований, методов разделения тромбоцитов и критериев оценки результатов».

Рис. 1

Разнообразие биологической активности МСК. МСК обладают широким спектром биологической активности, что позволяет находить множество потенциальных клинических применений. В настоящее время найдено 307 клинических испытаний по поиску «мезенхимальных стволовых клеток» и 32 по поиску «мезенхимальных стромальных клеток» ( http://clinicaltrials.gov ; оценка в июне 2013 г.). Поскольку точный механизм действия еще не раскрыт, комбинация биологических активностей, по-видимому, является благоприятной для успеха терапии.

Безусловно, тромбоцитарные факторы привлекли внимание как эффективный инструмент для дополнения клеточных культур, заменяющих FBS. Для повышения безопасности клеточной терапии Doucet et al. [14] инициировали использование HPL в добавлении культур мезенхимальных стромальных клеток.

Мезенхимальные стволовые / стромальные клетки

В 1970-х Friedenstein et al. [15,16] описали популяцию негематопоэтических предшественников, выделенных из костного мозга. Хотя уже описана способность дифференцироваться в различные мезодермальные клоны, такие как кости, хрящи, жир, строма костного мозга, сухожилия, мышцы, дерма и соединительные ткани, дальнейшие исследования приостановились до 1990-х годов [17,18].Только тогда эти негематопоэтические клетки были названы «мезенхимальными стволовыми клетками (МСК)» в соответствии с номенклатурой гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) [19]. Однако, поскольку более поздние исследования не соответствовали критерию самообновления стволовых клеток (1. самообновление, 2. неспециализированная и 3. способность дифференцироваться к специализированным типам клеток), было предложено лучше назвать клетки мезенхимальными. стромальные клетки (МСК) »[20].

Следует отметить, что до настоящего времени МСК характеризовались как адаптированные к культуре, размноженные ex vivo клетки.Эта популяция все еще неоднородна и содержит клетки-предшественники на разных стадиях созревания, а также зрелые стромальные клетки [21]. В сочетании с неоднородностью клеточных препаратов, несоответствия в использовании различных тканей в качестве исходного материала, а также в протоколах выделения и культивирования затрудняют сопоставимость результатов. Стремясь стандартизировать термин MSC, Международное общество клеточной терапии (ISCT) определило минимальные критерии, которые должны быть выполнены [22]:

— приверженность к пластиковым поверхностям клеточных культур, дающих клетки фибробластоидного фенотипа,

— экспрессия типичного маркеры (CD105, CD73 и CD90) и отсутствие экспрессии CD45, CD34, CD14 (или CD11b), CD79α (или CD19) и поверхностных молекул HLA-DR, а также

— дифференцировка по крайней мере в направлении трех мезодермальных хондроцитов, адипоцитов и линии остеоцитов.

(для дальнейшего обзора см. Специальные выпуски ТРАНСФУЗИОННОЙ МЕДИЦИНЫ И ГЕМОТЕРАПИИ Том 35, № 3 и 4, 2008 г. и Том 37, № 2, 2010 г. [23,24,25,26,27,28,29, 30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41]).

Ободренные такой широкой дифференцирующей способностью, были начаты ранние клинические испытания для широкого спектра заболеваний [42,43]. Основываясь на происхождении стромы в костном мозге, была оценена поддерживающая способность стромы для облегчения приживления HSC [44,45]. Несмотря на неожиданно низкий уровень приживления, проявился стойкий терапевтический эффект.Чтобы ответить на вопрос, как MSC достигают этого преимущества, не присутствуя на самом деле, исследование MSC вернулось «в исходное положение» [46]. В настоящее время плодотворные исследования выявили сильные иммуномодулирующие свойства МСК [47,48]. В сочетании с их низкой иммуногенностью, основанной на отсутствии HLA-DR и костимулирующих молекул, МСК были оценены как подходящие как для аутологичной, так и для аллогенной трансплантации [49]. В долгосрочной перспективе положительные терапевтические эффекты могут быть связаны со способностью МСК проникать в места воспаления и повреждения, где МСК выделяют различные прорегенеративные, антиапоптотические и антифиброзные факторы, способствующие процессам эндогенного восстановления [50].

Таким образом, благодаря их способности к дифференцировке, поддержке кроветворения, а также их иммуномодулирующим и прорегенеративным свойствам, МСК все шире применяются в клеточной терапии: в настоящее время найдено 307 клинических испытаний для поиска «мезенхимальных стволовых клеток» и 32 для «мезенхимальных стволовых клеток». стромальные клетки »( http://clinicaltrials.gov ; оценка в июне 2013 г.). Большое количество клинических испытаний вызывает интенсивные споры относительно скорости перевода [51]. Несмотря на впечатляющие результаты in vitro и многообещающие доклинические данные, клинические данные часто менее заметны.Научная база для некоторых клинических испытаний часто оказывается довольно слабой, потому что, несмотря на интенсивные исследования, механизм действия МСК остается неуловимым. Таким образом, важно тщательно взвесить предполагаемые выгоды и риски.

Хотя до настоящего времени в большинстве доклинических и клинических данных не сообщалось о серьезных побочных эффектах после применения МСК, что позволяет предположить, что МСК можно безопасно применять [52], были сообщения о серьезных осложнениях после инфузий стволовых клеток, включая летальные исходы. [51,53,54].В Корее, например, один пациент умер от тромбоэмболии легочной артерии после введения стволовых клеток, и Международное общество клеточной медицины (ICMS) сочло, что это «вероятно было вызвано или спровоцировано процедурой стволовых клеток» ( www.cellmedicinesociety.org ). Тем не менее, помимо этих нескольких случаев, которые, возможно, связаны с ориентированными на рынок компаниями, которые «открывают операции по всему миру и пользуются лазейками в нормативных актах других стран» [53], было зарегистрировано несколько неблагоприятных событий.Кальцификации наблюдались после трансплантации МСК или нефракционированного костного мозга в инфаркт сердца на мышиной модели [55]. Рост опухоли оказался облегченным после инфузии МСК [56,57]. Особенно латентные опухоли, такие как глиомы, саркомы и меланомы, а также метастазы стали проявляться после инфузии МСК. Это предполагает, что надзор за опухолью может быть нарушен иммуносупрессивной активностью МСК или что прямая интеграция в строму опухоли и секреция ангиогенных факторов могут способствовать росту опухоли [57].Активно обсуждается вопрос о том, вызывает ли экспансия ex vivo MSC, которая в большинстве случаев необходима для достижения клинически значимого количества клеток, спонтанные трансформации [58,59]. Однако несколько случаев, сообщающих о спонтанной трансформации, были вынуждены отказаться от своих публикаций: «спонтанная» трансформация произошла из-за лабораторного перекрестного заражения линиями опухолевых клеток. Таким образом, все же пришли к единому мнению, что по крайней мере человеческие МСК в целом претерпевают репликативное старение вместо злокачественной трансформации.Даже задокументированные случаи анеуплоидности, наблюдаемые в небольшом количестве препаратов МСК клинического масштаба, во всех случаях вызывали прогрессирующую остановку роста и старение [60]. Тем не менее, в качестве меры предосторожности необходимо достичь консенсуса по общим стандартам и согласованным протоколам для повышения как эффективности, так и безопасности.

На пути к производству мезенхимальных стромальных клеток без ксеногенов

Для обеспечения безопасности и эффективности все этапы производственного процесса MSC должны быть стандартизированы. Качество и эффективность клеток должны воспроизводиться.Однако производственный процесс для MSC сложен и состоит из закупок, изоляции, расширения и контроля качества [37,51,61,62]. Клинический успех связан с достаточным количеством жизненно важных и функциональных клеток. Кроме того, клеточный продукт не несет риска инфекций, аллергии или злокачественных новообразований. Таким образом, в процессе производства необходимо учитывать ряд соображений [63]. Вспомогательные реагенты представляют опасность для клеточного продукта. FBS обычно используется для изоляции и расширения MSC.Это очень сложная смесь белков и других факторов, которая по своей природе плохо определена и варьируется от партии к партии [1]. Из-за высокого риска заражения (сообщается, что положительная вирусная активность достигает 20-50%), FBS критически оценивается Европейским агентством по лекарственным средствам [64]. Поскольку МСК усваивают ксеногенные белки в больших количествах, возникает дополнительный риск аллергических реакций. Уже было продемонстрировано, что иммуногенность FBS ставит под угрозу терапевтический успех [49, 65, 66, 67]. С учетом этих соображений, условия культивирования, свободные от ксеногенов, представляются желательными.Из-за множества компонентов FBS, которые положительно (и отрицательно) влияют на адгезию (клетка-клетка и клеточный матрикс), митоз, выживаемость, апоптоз и т. Д., Химически определенная среда нуждается в оптимальном составе нескольких наиболее важных факторов для стимулирования по крайней мере, все ключевые функции сотовой связи. По этому трудно установить [68,69,70].

Хотя некоторые регулирующие органы могут допускать ксеногенные компоненты, такие как FBS, в фазе I клинических испытаний, ожидается, что более поздние клинические испытания, включающие большие группы пациентов, потребуют препаратов сывороточных или, по крайней мере, свободных от ксеногенов клеток.Хотя процедуры промывки или последовательное культивирование в плазме или сыворотке человека могут помочь снизить содержание ксеногенных белков, остаточный риск остается в силе [65,67].

Чтобы заменить FBS, многочисленные исследования теперь относятся к «гуманизированным» условиям культивирования. «Гуманизированные» добавки включают человеческую сыворотку (аутологичную или объединенную аллогенную), сыворотку пуповинной крови, а также различные производные тромбоцитов [69,70]. Поскольку эти компоненты крови человека уже много лет используются в клинической практике, могут быть получены от здоровых доноров и были протестированы в соответствии со стандартами банка крови на инфекционные и иммунологические параметры, потенциальный риск снижается.Подобно FBS, добавки, полученные из компонентов крови человека, включают множество важных факторов, способных стимулировать рост клеток. Плазма человека, аутологичная и аллогенная сыворотка, а также сыворотка пуповинной крови были исследованы в обзоре [70]. Тем не менее, факторы, происходящие от тромбоцитов человека, являются наиболее интенсивно изучаемой альтернативой FBS для культивирования МСК.

Релизат тромбоцитов

Как уже говорилось, тромбоциты человека содержат множество факторов, способствующих клеточному росту клеток и клеточных линий [3].Ранние исследования оценивали стимулирующие рост МСК эффекты факторов роста тромбоцитов в PRP, высвобождаемых при стимуляции кальцием и тромбином [71,72]. Скоагулированный фибрин впоследствии удаляется центрифугированием и фильтрацией. Оба исследования описали ускоренное расширение и миграцию, но различались по потенциалу остеогенной дифференцировки. Таким образом, факторы тромбоцитов, высвобождаемые физиологическими стимулами, могут иметь некоторые преимущества. Было показано, что некоторые вещества активируют тромбоциты, включая тромбин, коллаген, АДФ / адреналин и пептид, активирующий рецептор тромбина (TRAP) [73].Интересно, что собственные исследования показали, что процессированный тромбин-активированный рилизат тромбоцитов в плазме (tPRP) и HPL способствуют разным скоростям пролиферации MSC, происходящих из костного мозга и жировой ткани. В то время как HPL способствовал значительно более высокой скорости пролиферации MSC костного мозга, чем tPRP [74], стромальные клетки жировой ткани проявляли, если вообще проявляли, аналогичные пролиферативные ответы на HPL и tPRP [74,75]. Дифференциальная протеомика HPL и tPRP идентифицировала 20 дифференциальных белков (Kinzebach et al. Неопубликованные данные).Идентифицированные белки также обозначают различия между стромальными клетками костного мозга и жировой ткани: например, фибриноген значительно поддерживает рост стромальных клеток, полученных из жировой ткани (ASC), а аполипопротеин A1 избирательно снижает скорость пролиферации МСК костного мозга.

Лизат тромбоцитов

Релизат тромбоцитов содержит только те факторы, которые высвобождаются после активации тромбоцитов. Лизаты тромбоцитов (HPL), напротив, содержат все факторы, из которых состоят тромбоциты. Их можно легко получить путем механического разрушения концентратов тромбоцитов путем замораживания и оттаивания.Последующее центрифугирование отделяет остатки тромбоцитов от супернатанта, содержащего все биоактивные факторы тромбоцитов. По сравнению с химической активацией тромбоцитов для получения рилизата механический лизис для получения HPL представляется более предпочтительным, поскольку он намного проще, требует меньше времени и меньше затрат. Кроме того, это позволяет избежать использования дополнительных веществ, таких как тромбин, которые могут вызывать побочные эффекты.

Концентраты тромбоцитов, используемые для производства HPL, можно либо заморозить сразу после сдачи, либо использовать в конце срока годности (4-6 дней после сдачи в зависимости от действующего местного законодательства) [76,77,78].Таким образом, те концентраты тромбоцитов, которые не используются для переливания тромбоцитов, могут быть выделены для производства HPL, минимизируя распад уже сданных единиц и, следовательно, избегая дополнительной сдачи крови от доноров. Затем концентраты тромбоцитов могут храниться замороженными, размороженными, центрифугированными, объединенными и стерилизованными после карантинного хранения (аналогично терапевтической свежезамороженной плазме) для повышения безопасности [77]. Конечный HPL можно хранить при -20 ° C в течение длительного времени, поддерживая стабильное содержание фактора роста [79].

Doucet et al. [14] показали, что полученный из PRP HPL хорошо поддерживает изоляцию и экспансию МСК, в то время как склонность к остео-, адипо- и хондрогенной дифференцировке сохраняется по сравнению с FBS. Последовали различные исследования, в которых HPL использовался в качестве совместимого с GMP заменителя FBS при расширении MSC, поддерживая даже значительно увеличенную пролиферацию MSC [73,74,80,81,82,83,84,85]. Для крупномасштабного размножения МСК может потребоваться 50–100 обычных флаконов для культивирования тканей. С ними трудно обращаться, и они подвержены загрязнению.Таким образом, в нескольких исследованиях оценивали изоляцию и распространение в биореакторе с использованием HPL [86,87], чтобы определить риски терапии МСК. В большинстве этих исследований сообщается о меньшем размере MSC и ускорении пролиферации по сравнению с FBS. Кроме того, HPL увеличивал не только размер, но и количество колоний [82,88]. Важно отметить, что только в среде с добавлением FBS наблюдали клональную хромосомную нестабильность, но не в условиях гуманизированного культивирования [59,82,89].

Хотя считается, что МСК избегают алло-узнавания, митогены, такие как FGF и PDGF-BB, а также воспалительные цитокины, как было задокументировано, индуцируют экспрессию HLA-DR в МСК и тем самым стимулируют Т-клетки CD4.Важно отметить, что HPL, по-видимому, не вызывает экспрессию HLA-DR [90]. Относительно сохранения иммуномодулирующих свойств существуют противоречивые данные. Flemming et al. [91] непосредственно сравнивали полученные из костного мозга МСК, культивируемые в FBS или HPL, в отношении их иммуносупрессивной способности. Ингибирующий эффект на пролиферацию Т-клеток был аналогичным, как и активация специфичных к цитомегаловирусу Т-клеток. Аналогичные данные были представлены Bernardo et al. [83]. Напротив, Abdelrazik et al. [92] определили изменение экспрессии поверхностного белка, имеющее отношение к иммуномодуляции и адгезии, после культивирования в HPL.Это соответствовало уменьшенному подавлению пролиферации Т- и NK-клеток. Эти авторы сравнили MSC, увеличенные в трех разных партиях FBS (включая две коммерчески доступные среды для роста MSC) с добавкой HPL.

Анализ микроматрицы выявил подавление нескольких семейств генов, которые участвуют в дифференцировке / развитии, клеточной адгезии / взаимодействии внеклеточного матрикса и рецептора, передаче сигналов TGF-β и апоптозе, индуцированном тромбоспондином-1. Кластеры генов, связанные с клеточным циклом, репликацией ДНК и метаболизмом пуринов, были активированы одновременно с усиленной пролиферацией в HPL, а также в сыворотке крови человека [84,93].Хотя эти изменения в экспрессии генов незначительны, они могут вызывать различия в терапевтическом потенциале МСК. Самоориентация и приживление — предпосылки для большинства терапевтических вмешательств. Таким образом, изменения в молекулах клеточной адгезии могут иметь соответствующие последствия. Мы обнаружили, что снижение экспрессии интегрина α6 (CD49f) в стромальных клетках жировой ткани, культивируемых в гуманизированной среде, коррелирует с замедлением передачи сигналов интегрина и снижением адгезии к ламинину [94]. Мы также наблюдали снижение адгезии к эндотелиальным клеткам.Наконец, меньшее количество клеток, культивируемых в сыворотке крови человека, было обнаружено в легких мышей, которым вводили MSC, в отличие от большего количества клеток, культивированных в FBS. Связано ли это уменьшение захвата с меньшим размером клеток, уменьшенным взаимодействием с молекулами внеклеточного матрикса, изменением специфичности самонаведения или другими причинами, является предметом дальнейшего анализа. Хотя это наблюдается для клеток, культивируемых в сыворотке крови человека, подобные идеи обсуждаются Lucchini et al. [95]. Таким образом, выбор добавки может сыграть решающую роль при балансировании риска и эффективности: снижение адгезии к легким может снизить потенциальный риск тромбоэмболии легочной артерии.Однако он может также снижать высвобождение иммуномодулирующего TSG-6 (TNF-стимулированного белка гена 6), секретируемого прилипшими к легким МСК, для обеспечения защиты, например, при инфаркте миокарда [96].

Сочетая стимулирующий рост эффект HPL на MSC, остеоиндуктивные свойства в кости и каркасные свойства фибрина, HPL был использован для содействия инженерии костной ткани. Dozza et al. [97], например, продемонстрировали, что МСК, увеличенные с помощью HPL, применяемые в качестве конструкции из коллагена или фибрина в несцементированном протезе бедра, значительно способствовали образованию новой кости по сравнению с одним протезом.Кроме того, есть указания на то, что HPL может вызывать остеогенную дифференцировку без каких-либо дополнительных остеогенных стимулов. Только керамика, засеянная МСК, выращенными в HPL, была способна к эктопическому формированию кости [88,98]. На основе этого потенциала дифференцировки эти клетки использовались для лечения пациентов в различных ортопедических состояниях. Centeno et al. [99] сообщили о результатах 339 пациентов, получавших аутологичные МСК костного мозга, увеличенные в аутологичных HPL. Наблюдение за нежелательными явлениями выявило несколько случаев, наиболее вероятно связанных с процедурой повторной имплантации, и три случая, возможно, связанных с применением стволовых клеток.Эти несколько случаев были либо купированы самостоятельно, либо излечены небольшими терапевтическими вмешательствами. Важно отметить, что неопластических трансформаций в месте инъекции стволовых клеток не наблюдалось. Хотя в общей сложности у двух пациентов развились опухоли, частота новообразований была аналогична контрольной популяции. 53,1% пациентов сообщили об облегчении симптомов в период наблюдения в течение 11 месяцев.

Lange et al. [100] наблюдали снижение потенциала адипогенной дифференцировки МСК, расширенных в HPL. Среди прочего, снижение экспрессии простагландин D2-синтазы липокалинового типа было связано с этим эффектом.Авторы приходят к выводу, что HPL может предлагать возможность предотвратить нежелательную адипогенную дифференцировку.

Критерии качества лизата тромбоцитов

Человеческие добавки, как и FBS, все еще следует считать недостаточно определенными, и они разделяют некоторые проблемы безопасности. Обычно концентраты тромбоцитов производятся и выпускаются для терапевтических целей для переливания пациентам с сильно сниженным числом тромбоцитов и / или нарушенной функцией тромбоцитов, прежде чем они будут преобразованы для использования в качестве добавки для МСК.Будучи выпущенным в качестве продукта крови, уже выполнены строгие критерии отбора доноров крови, а также чувствительное вирусное тестирование NAT, что обеспечивает безопасность исходного материала для производства HPL [77,78].

Аутологичный или аллогенный

При переливании тромбоцитов учитываются группы крови и резус-факторы, чтобы избежать побочных эффектов для пациентов. Для приготовления аутологичных МСК можно рассмотреть аутологичный HPL. Однако у тяжелых пациентов сдача цельной крови или аферез могут быть опасными.Из-за ограниченного объема HPL от одного пациента количество клеток, достигаемое на этапах расширения, также может быть ограничено. Кроме того, различия между отдельными аутологичными донорами затрудняют стандартизацию и увеличивают необходимость контроля качества каждой отдельной партии HPL. Таким образом, большинство текущих протоколов полагается на объединение концентратов тромбоцитов от 50 здоровых доноров крови [85]. Этап криоконсервации перед дальнейшим объединением позволяет карантинное хранение отдельных концентратов тромбоцитов.Они могут быть выпущены для производства HPL клинического уровня после того, как доноры будут повторно протестированы на все инфекционные маркеры после повторной сдачи крови [77]. Полученную большую партию легко контролировать в соответствии со стандартами банка крови, а также на содержание белка и факторов роста. Для пациентов из группы риска, например могут рассматриваться пациенты с известными антителами, аллогенные препараты тромбоцитов, соответствующие группе крови / резус-фактору [78]. Интересно, что возраст донора, по-видимому, влияет на качество HPL: сравнение пуповины с PRP взрослых выявило более высокую концентрацию митогенных факторов роста в препаратах, полученных из пуповинной крови [101].Подобный HPL от более молодых доноров (<35 лет) был более пролиферативным, чем от более старых доноров, что увеличивало экспрессию маркеров старения [102].

Концентрация тромбоцитов

Решающее значение для производства МСК имеет концентрация тромбоцитов, которая напрямую связана с концентрацией фактора роста. Lange et al. [84] оценили различные концентрации тромбоцитов в качестве 5% добавки в основной среде, чтобы оценить влияние на пролиферацию МСК: 1,5, 1,0, 0,75 и 0.5 × 10 ⁹ / мл. Стало очевидно, что концентрация тромбоцитов ниже 1,5 × 10 ⁹ / мл значительно снижает пролиферативный эффект.

Срок годности концентратов тромбоцитов до производства HPL

Для снижения риска бактериальных инфекций, передаваемых при переливании крови, в Германии срок хранения концентратов тромбоцитов составляет 4 дня. Различные лаборатории выделяют концентраты тромбоцитов в конце этого срока годности для производства HPL. Бактериальный скрининг, дополненный последующим тестированием доноров, рассматривается в качестве меры безопасности.Fekete et al. [77] сравнили HPL, приготовленный из концентратов тромбоцитов через 2 или 6 дней после сдачи крови без каких-либо изменений в качестве. Следовательно, не нужно выбрасывать концентрат тромбоцитов, если он не используется для первоначального предполагаемого терапевтического использования, но его можно преобразовать в производство HPL после того, как истечет срок хранения.

Плазма или аддитивный раствор для тромбоцитов

Хотя наиболее важные данные, касающиеся концентраций факторов роста, значительно различались в различных публикациях [79].Эти расхождения в основном связаны с разными методами приготовления концентратов тромбоцитов с использованием плазмы или раствора добавки для плазмы. Для уменьшения побочных эффектов плазмы был введен раствор плазменной добавки [78]. Первоначально убежденные, что компоненты плазмы в сочетании с факторами тромбоцитов составляют оптимальную добавку МСК, мы, например, оценили пул свежеприготовленных концентратов тромбоцитов, полученных из лейкоцитов, приготовленных в плазме АВ человека одного из доноров крови [73,74].Позже мы и другие исследователи протестировали устаревшие «обычные» концентраты тромбоцитов. В пуле из 8-50 доноров не было очевидных отклонений от свежеприготовленного лизата тромбоцитов, что позволяет предположить, что устаревшие концентраты тромбоцитов — вместо автоклавирования — можно криоконсервировать для производства HPL [77,85]. Например, группа Дирка Странка подала патент США под названием «Бесплазменный лизат тромбоцитов для использования в качестве добавки в клеточных культурах и для приготовления клеточных терапевтических средств» (Номер публикации: US 2009/0305401 A1; 10 декабря, г. 2009 г.).

Баффи или концентраты тромбоцитов, полученные из афереза

В рамках своего исследования Fekete et al. [77], кроме того, сравнивали HPL класса GMP, полученный из объединенных лейкоцитов, полученных из цельной крови, с таковыми из концентратов тромбоцитов, полученных из афереза. Не было значительных различий в отношении содержания цитокинов (bFGF, sCD40L, PDGF-AA, PDGF-AB / BB, sVCAM-1, sICAM-1, RANTES, TGF-β1), соответствующих аналогичной поддержке пролиферации МСК.

Специфические цитокины

Как уже упоминалось, HPL содержит множество цитокинов, хемокинов и растворимых молекул адгезии, которые были интенсивно изучены протеомными подходами [8,82,103].Однако концентрации между группами значительно различаются [77,79]. И те факторы роста, которые необходимы для выделения и экспансии МСК, еще не определены. Необходимо установить, могут ли состав и концентрация факторов, полученных из тромбоцитов, служить параметрами контроля качества для HPL.

FGF2 / bFGF, PDGF, EGF, IGF и TGF, среди прочего, были изучены, но не смогли поддержать рост MSC при добавлении по отдельности или в комбинации с бессывороточной средой [104]. Тем не менее, добавленные в среду с добавлением FBS, эти факторы роста были способны стимулировать пролиферацию и дифференцировку.Однако этот эффект может не обязательно иметь место в «гуманизированных» культурных системах. Подобно нашим собственным, но неопубликованным данным, bFGF, по-видимому, поддерживает экспансию культур MSC костного мозга, дополненных FBS, но не делает этого в системах, дополненных HPL [105]. Нейтрализация PDGF-AB / BB, TGF-β1 и FGF значительно снижает пролиферативный эффект HPL, причем наиболее сильные эффекты наблюдаются при нейтрализации одного FGF или в комбинации с PDGF-BB [77]. Хотя эти факторы кажутся важными, было невозможно вызвать пролиферацию смесью этих факторов роста в бессывороточной среде.Использование молекул внеклеточного матрикса в качестве факторов прикрепления также не имитирует HPL. Очевидно, что для полной поддержки распространения MSC необходимы дополнительные компоненты.

Стратегии уменьшения патогенов

Сочетая в себе ряд преимуществ, человеческие добавки по-прежнему создают риск передачи инфекционных агентов. Гемонадзор плюс карантинное хранение могут частично снизить риск диагностического окна [77]. Тем не менее, все еще существует остаточный риск из-за патогенов, которые в настоящее время обычно не тестируются (особенно вирусов).Затем при хранении при комнатной температуре концентраты тромбоцитов несут риск необнаруженного бактериального заражения. Таким образом, для концентратов эритроцитов и тромбоцитов были исследованы различные стратегии снижения или инактивации патогенов [106]. Протоколы инактивации патогенов, основанные на фотохимической обработке, были разработаны, и инактивированная патогенами человеческая сыворотка не показала различий в отношении качества МСК по сравнению с контрольной сывороткой [107]. Инактивированный вирусами HPL был представлен Shih et al.[108]. Здесь HPL обрабатывали растворителем / детергентом, затем экстрагировали соевым маслом и дополнительно очищали хроматографией C18 и стерильной фильтрацией. Смесь факторов роста сравнивали с помощью полуколичественного массива человеческих цитокиновых антител, перекрестно реагирующих с некоторыми бычьими белками. 22 цитокина показали более высокую концентрацию в инактивированном вирусами HPL, чем в FBS, и только два цитокина (ангиопоэтин-2 и bFGF) были обнаружены в более низких концентрациях. Вирусно-инактивированный HPL индуцировал массивную пролиферацию по сравнению с FBS.Типичные характеристики МСК, фенотип, иммунный фенотип и дифференциация были сохранены, что указывает на осуществимость этого подхода.

Клинические испытания мезенхимальных стромальных клеток в добавках для человека

В нескольких исследованиях уже применялись «гуманизированные» условия культивирования для увеличения MSC для клинических испытаний. Исследование, представленное von Bonin et al. [109] оценивали увеличение МСК костного мозга в HPL человека у пациентов с рефрактерной реакцией «трансплантат против хозяина» (GvHD). Двое из 13 пациентов, прошедших лечение, получили пользу от лечения.После второй дозы 5 из 11 пациентов ответили облегчением своих симптомов. Аналогичные результаты были получены в исследовании, в котором 11 педиатрических пациентов, страдающих острой или хронической GvHD, лечились с помощью MSC, увеличенного в HPL. Некоторые пациенты получали до 5 инфузий МСК без острых и поздних побочных эффектов. Полный ответ наблюдался у 23,8%, а частичная ремиссия — у 47,6% пациентов [95]. Напротив, сообщалось о более высоком уровне полного ответа при анализе увеличения MSC в FBS.Здесь был получен полный ответ у 30 из 55 пациентов [110]. Кроме того, у 9 пациентов наблюдалось улучшение симптомов РТПХ. Обсуждается, могут ли различия в способе экспансии МСК вызывать различную миграцию к хемотаксическим стимулам и тем самым способствовать тому или иному органу, пораженному РТПХ. Таким образом, обсуждение подходит к описанным изменениям в экспрессии генов, связанных с адгезией и хомингом.

Заключение

Для стандартизированных MSC, производимых на рутинной основе, среды определенного химического состава, одобренные для GMP и клинического использования, считаются конечной конечной точкой.Пока этого не произошло, объективные добавки, полученные из продуктов крови человека (сыворотка или лизат тромбоцитов), стали разумной альтернативой FBS. Rauch et al. [79] определили критерии качества для HPL: 10-20-кратное обогащение факторов α-гранул по сравнению с сывороткой и снижение общего содержания белка, включая иммуноглобулины и альбумин, достигаемое промыванием.

Любое изменение условий культивирования может иметь большое влияние на качество клеток. Переход с FBS на человеческие добавки вызывает ощутимые изменения.Хотя основные характеристики МСК, определенные ISCT, по-видимому, сохранены, продолжительные исследования показали, что выбор добавки, например, влияет на экспрессию генов и белков. Гуманизированные культуральные системы по сравнению с FBS изменяют адгезию, а также самонаведение. Таким образом, рекомендуется детально изучить клеточные эффекты перед этим — просто исходя из предположения, что FBS и HPL имеют сходные эффекты — изменяя условия культивирования между доклиническими и клиническими испытаниями. Однако это осложняется тем фактом, что механизм действия еще не определен полностью для клеток, культивируемых FBS.Таким образом, нельзя сравнивать эффекты измененных условий культуры. Ожидается, что эти эффекты будут еще более значительными при разработке сред с определенным химическим составом, состоящих только из нескольких факторов и лишенных множества других неопределенных факторов, присутствующих в HPL или сыворотке. В противном случае идентификация воздействия определенных медиа-компонентов может позволить сгенерировать спроектированный MSC для конкретных терапевтических приложений, аналогичный средам дифференциации, уже примененным для нацеливания на дифференциацию MSC.

Следует отметить, что питательная среда является только одним строительным блоком в сложной структуре производственного процесса MSC, соответствующего требованиям GMP.Установление стандартизированных производственных протоколов, параметров контроля качества и анализов имеет первостепенное значение. Это становится еще более важным с учетом быстрых темпов начала клинических испытаний, часто основанных только на слабых научных данных. Несмотря на активизацию исследовательской работы в области перевода, ожидается, что только соглашение о стандартизированных протоколах в сочетании со строго регулируемой средой, выполняемой экспертами в области производства GMP, позволит провести значимые сравнительные многоцентровые исследования, оценивающие осуществимость, безопасность и эффективность.

Тот факт, что переход к клиническим испытаниям с использованием МСК быстро развивается, даже без знания механизма действия, усложняет эту потребность. Чтобы не замедлить клиническую эволюцию МСК, требуется интенсивное взаимодействие между фундаментальными и клиническими исследованиями, чтобы углубить наши знания и разработать безопасные, но эффективные новые методы лечения на основе МСК.

Выражение признательности

Эта работа была поддержана исследовательскими фондами Федерального министерства образования и исследований Германии (START-MSC: 01GN0531 и 01GN0939) и проектом, заказанным Европейским сообществом (CASCADE: FP7-223236).

Заявление о раскрытии информации

Конфликт интересов отсутствует.

Список литературы

Gstraunthaler G: Альтернативы использованию фетальной бычьей сыворотки: бессывороточная культура клеток. Altex-Altern Tierexp 2003; 20: 275-281.
Нурден А.Т.: Тромбоциты, воспаление и регенерация тканей. Thromb Haemost 2011; 105 (приложение 1): S13-33.
Eastment CT, Sirbasku DA: Лизат тромбоцитов человека содержит активность фактора роста для установленных клеточных линий, полученных из различных тканей нескольких видов.In vitro 1980; 16: 694-705.
Хара Й., Штайнер М., Балдини М.Г.: Тромбоциты как источник факторов, способствующих росту опухолевых клеток. Cancer Res 1980; 40: 1212-1216.
Choi YC, Morris GM, Sokoloff L: Влияние лизата тромбоцитов на рост и синтез сульфатированных гликозаминогликанов в культурах суставных хондроцитов.Arthritis Rheum 1980; 23: 220-224.
Dugrillon A, Eichler H, Kern S, Kluter H: аутологичная концентрированная плазма, обогащенная тромбоцитами (cprp) для местного применения при регенерации костей. Int J Oral Maxillofac Surg 2002; 31: 615-619.
Ренду Ф., Брохард-Бон Б. Реакция высвобождения тромбоцитов: составные части гранул, секреция и функции.Тромбоциты 2001; 12: 261-273.
Maynard DM, Heijnen HFG, Horne MK, White JG, Gahl WA: Протеомный анализ альфа-гранул тромбоцитов с использованием масс-спектрометрии. Дж. Тромб Хемост 2007; 5: 1945-1955.
Jonas JB, Dugrillon A, Kluter H, Kamppeter B: Субконъюнктивальная инъекция аутологичного концентрата тромбоцитов при лечении чрезмерной фильтрации пузыря.J Glaucoma 2003; 12: 57-58.
Sommeling CE, Heyneman A, Hoeksema H, Verbelen J, Stillaert FB, Monstrey S: Использование богатой тромбоцитами плазмы в пластической хирургии: систематический обзор. J Plast Reconstr Aesthet Surg 2013; 66: 301-311.
Вавкен П., Садоги П., Мюррей М.М.: Влияние концентратов тромбоцитов на созревание трансплантата и заживление границы трансплантат-кость при реконструкции передней крестообразной связки у людей: систематический обзор контролируемых испытаний.Артроскопия 2011; 27: 1573-1583.
Sheth U, Simunovic N, Klein G, Fu F, Einhorn TA, Schemitch E, Ayeni OR, Bhandari M: Эффективность использования аутологичной плазмы, богатой тромбоцитами, по ортопедическим показаниям: метаанализ. Журнал Bone Joint Surg 2012; 94: 298-307.
Martinez-Zapata MJ, Marti-Carvajal AJ, Sola I, Exposito JA, Bolibar I, Rodriguez L, Garcia J: Аутологичная плазма, обогащенная тромбоцитами, для лечения хронических ран.Кокрановская база данных Syst Rev 2012; 10: CD006899.
Doucet C, Ernou I, Zhang Y, Llense JR, Begot L, Holy X, Lataillade JJ: Лизаты тромбоцитов способствуют размножению мезенхимальных стволовых клеток: безопасный заменитель животной сыворотки в приложениях клеточной терапии. J. Cell Physiol 2005; 205: 228-236.
Фриденштейн А.Ю., Деригласова Ю.Ф., Кулагина Н.Н., Панасук А.Ф., Рудакова С.Ф., Лурия Е.А., Руадков И.А.: Предшественники фибробластов в различных популяциях кроветворных клеток, обнаруженные методом анализа колоний in vitro. Exp Hematol 1974; 2: 83-92.
Фриденштейн А.Ю., Петракова К.В., Куролесова А.И., Фролова Г.П. Гетеротопия костного мозга.Анализ клеток-предшественников остеогенных и кроветворных тканей. Трансплантация 1968; 6: 230-247.
Pittenger MF, Mackay AM, Beck SC, Jaiswal RK, Douglas R, Mosca JD, Moorman MA, Simonetti DW, Craig S, Marshak DR: Многолинейный потенциал мезенхимальных стволовых клеток взрослого человека.Наука 1999; 284: 143-147.
Каплан А.И.: Мезенгенический процесс. Clin Plast Surg 1994; 21: 429-435.
Каплан А.И.: Мезенхимальные стволовые клетки.J Orthop Res 1991; 9: 641-650.
Horwitz EM, Le Blanc K, Dominici M, Mueller I, Slaper-Cortenbach I, Marini FC, Deans RJ, Krause DS, Keating A: Уточнение номенклатуры для MSC: Заявление о позиции Международного общества клеточной терапии. Цитотерапия 2005; 7: 393-395.
Певзнер-Фишер М., Левин С., Зипори Д.: Истоки неоднородности мезенхимальных стромальных клеток. Стволовые клетки Ред. 2011; 7: 560-568.
Dominici M, Le Blanc K, Mueller I, Slaper-Cortenbach I, Marini F, Krause D, Deans R, Keating A, Prockop D, Horwitz E: Минимальные критерии для определения мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток.Заявление о позиции Международного общества клеточной терапии. Цитотерапия 2006; 8: 315-317.
Schafer R, Northoff H: Характеристики мезенхимальных стволовых клеток — новые звезды в регенеративной медицине или непризнанные старые собратья в аутологичной регенерации? Transfus Med Hemother 2008; 35: 154-159.
Bourin P, Gadelorge M, Peyrafitte JA, Fleury-Cappellesso S, Gomez M, Rage C, Sensebe L: Мезенхимальные клетки-предшественники: происхождение, выделение и культура ткани. Transfus Med Hemother 2008; 35: 160-167.
Бибак К. Основы биологии мезенхимальных стволовых клеток.Transfus Med Hemother 2008; 35: 151-152.
Rojewski MT, Weber BM, Schrezenmeier H: Фенотипическая характеристика мезенхимальных стволовых клеток из различных тканей. Transfus Med Hemother 2008; 35: 168-184.
Wagner W, Saffrich R, Ho AD: Стромальная активность мезенхимальных стромальных клеток.Transfus Med Hemother 2008; 35: 185-193.
Bifari F, Lisi V, Mimiola E, Pasini A, Krampera M: Иммунная модуляция мезенхимальными стволовыми клетками. Transfus Med Hemother 2008; 35: 194-204.
Коллас П., Ноер А., Соренсен А. Л.: Эпигенетическая основа дифференцировочного потенциала мезенхимальных и эмбриональных стволовых клеток.Transfus Med Hemother 2008; 35: 205-215.
Frith J, Genever P: Транскрипционный контроль дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток. Transfus Med Hemother 2008; 35: 216-227.
Gimble JM, Guilak F, Nuttall ME, Sathishkumar S, Vidal M, Bunnell BA: потенциал дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток in vitro.Transfus Med Hemother 2008; 35: 228-238.
Куинн C, Flake AW: потенциал дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток in vivo: пренатальные и постнатальные модельные системы. Transfus Med Hemother 2008; 35: 239-247.
Ratajczak MZ, Zuba-Surma EK, Wojakowski W, Ratajczak J, Kucia M: Костный мозг — дом универсальных стволовых клеток.Transfus Med Hemother 2008; 35: 248-259.
Tonn T, Barz D: Msc — мультипотентная стромальная клетка в поисках клинического применения. Transfus Med He-mother 2008; 35: 269-270.
Klingemann H, Matzilevich D, Marchand J: Мезенхимальные стволовые клетки — источники и клиническое применение.Transfus Med Hemother 2008; 35: 272-277.
Брук Дж., Россетти Т., Илич Н., Мюррей П., Хэнкок С., Пелеканос Р., Аткинсон К.: моменты, которые следует учитывать при разработке клинических испытаний на основе мезенхимальных стволовых клеток. Transfus Med Hemother 2008; 35: 279-285.
Bieback K, Schallmoser K, Kluter H, Strunk D: Клинические протоколы выделения и размножения мезенхимальных стромальных клеток.Transfus Med Hemother 2008; 35: 286-294.
Slaper-Cortenbach IC: Текущие правила производства мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток для клинического применения. Transfus Med Hemother 2008; 35: 295-298.
Lepperdinger G, Brunauer R, Gassner R, Jamnig A, Kloss F, Laschober GT: Изменения функциональной способности мезенхимальных стволовых клеток из-за старения или возрастных заболеваний — последствия для клинических приложений и набора доноров.Transfus Med Hemother 2008; 35: 299-305.
Henschler R, Deak E, Seifried E: Homing мезенхимальных стволовых клеток. Transfus Med Hemother 2008; 35: 306-312.
Линднер Ю., Крамер Дж., Рохведель Дж., Шленке П. Мезенхимальные стволовые или стромальные клетки: к лучшему пониманию их биологии? Transfus Med Hemother 2010; 37: 75-83.
Бернардо М.Э., Пальяра Д., Локателли Ф .: Терапия мезенхимальными стромальными клетками: революция в регенеративной медицине? Трансплантация костного мозга 2012; 47: 164-171.
Horwitz EM, Prockop DJ, Fitzpatrick LA, Koo WW, Gordon PL, Neel M, Sussman M, Orchard P, Marx JC, Pyeritz RE, Brenner MK: Трансплантируемость и терапевтические эффекты мезенхимных клеток костного мозга у детей с несовершенным остеогенезом.Нат Мед 1999; 5: 309-313.
Koc ON, Gerson SL, Cooper BW, Dyhouse SM, Haynesworth SE, Caplan AI, Lazarus HM: быстрое восстановление кроветворения после совместного слияния аутологичных стволовых клеток и мезенхимальных стволовых клеток костного мозга на поздних стадиях рака груди, получающих высокодозную химиотерапию. .Дж. Клин Онкол 2000; 18: 307-316.
Le Blanc K, Samuelsson H, Gustafsson B, Remberger M, Sundberg B, Arvidson J, Ljungman P, Lonnies H, Nava S, Ringden O: трансплантация мезенхимальных стволовых клеток для улучшения приживления гемопоэтических стволовых клеток. Лейкемия 2007; 21: 1733-1738.
Прокоп Д.Д.: «Стволость» не объясняет восстановление многих тканей мезенхимальными стволовыми / мультипотентными стромальными клетками (MSCS). Clin Pharmacol Ther 2007; 82: 241-243.
Le Blanc K, Rasmusson I, Sundberg B, Gotherstrom C, Hassan M, Uzunel M, Ringden O: Лечение тяжелой острой болезни трансплантат против хозяина с помощью сторонних гаплоидентичных мезенхимальных стволовых клеток.Ланцет 2004; 363: 1439-1441.
Ле Блан К., Таммик Л., Сандберг Б., Хейнсворт С. Е., Рингден О. Мезенхимальные стволовые клетки ингибируют и стимулируют смешанные культуры лимфоцитов и митогенные реакции независимо от основного комплекса гистосовместимости. Сканд Дж. Иммунол 2003; 57: 11-20.
Сундин М., Рингден О., Сундберг Б., Нава С., Готерстром С., Ле Блан К. Нет аллоантител против мезенхимальных стромальных клеток, но присутствуют антитела против плода телячьей сыворотки после трансплантации реципиентам аллогенных гемопоэтических стволовых клеток.Haematologica 2007; 92: 1208-1215.
Каплан А.И., Корреа Д: MSC: аптека для травм. Клеточная стволовая клетка 2011; 9: 11-15.
Bianco P, Barker R, Brustle O, Cattaneo E, Clevers H, Daley GQ, De Luca M, Goldstein L, Lindvall O, Mummery C, Robey PG, Sattler de Sousa EBC, Smith A: Регулирование терапии стволовыми клетками при атаке в Европа: по ком звонит колокол.EMBO J 2013; 32: 1489-1495.
Sensebe L, Krampera M, Schrezenmeier H, Bourin P, Giordano R: Мезенхимальные стволовые клетки для клинического применения. Vox Sang 2010; 98: 93-107.
Сираноски Д: Смерть в Корее вызывает расследование.Природа 2010; 468: 485.
Tuffs A: Лечение стволовыми клетками в Германии находится под пристальным вниманием после смерти ребенка. Br Med J 2010; 341
Брайтбах М., Бостани Т., Роэлл В., Ся Й, Девальд О., Нигрен Дж. М., Фрис Дж. В., Тиман К., Болен Х., Хешелер Дж., Вельц А., Блох В., Якобсен С. Е., Флейшманн Б. К.: Потенциальные риски трансплантации клеток костного мозга в инфаркт сердца.Кровь 2007; 110: 1362-1369.
Рамасами Р., Лам Э. У., Соейро И., Тисато В., Бонне Д., Дацци Ф .: Мезенхимальные стволовые клетки подавляют пролиферацию и апоптоз опухолевых клеток: влияние на рост опухоли in vivo. Лейкемия 2007; 21: 304-310.
Клопп А.Х., Гупта А., Спет Э., Андрефф М., Марини Ф. 3-й: Краткий обзор: анализ расхождения в литературе: поддерживают или подавляют рост опухоли мезенхимальные стволовые клетки? Стволовые клетки 2011; 29: 11-19.
Lepperdinger G, Brunauer R, Jamnig A, Laschober G, Kassem M: Спорный вопрос: безопасно ли использовать мезенхимальные стволовые клетки в клеточной терапии? Эксперимент Геронтол 2008; 43: 1018-1023.
Prockop DJ, Brenner M, Fibbe WE, Horwitz E, Le Blanc K, Phinney DG, Simmons PJ, Sensebe L, Keating A: Определение рисков терапии мезенхимальными стромальными клетками.Цитотерапия 2010; 12: 576-578.
Tarte K, Gaillard J, Lataillade JJ, Fouillard L, Becker M, Mossafa H, Tchirkov A, Rouard H, Henry C, Splingard M, Dulong J, Monnier D, Gourmelon P, Gorin NC, Sensebe L: производство клинического уровня мезенхимные стромальные клетки человека: возникновение анеуплоидии без трансформации.Кровь 2010; 115: 1549-1553.
Бибак К., Кинзебах С., Карагианни М.: Перевод исследований в производство мезенхимальных стромальных клеток в клиническом масштабе. Стволовые клетки Int 2011; 2010: 193519.
Sensebe L: производство мезенхимальных стволовых клеток клинического уровня.Biomed Mater Eng 2008; 18 (1 доп.): S3-10.
EMEA, Комитет по передовой терапии (CAT): Reflection Paper on Stem Cells Medical Products. EMA / CAT / 571134, 2011. www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2011/02/WC500101692.pdf.
EMEA, Комитет по патентованным лекарственным средствам (CPMP): Руководство по использованию бычьей сыворотки при производстве лекарственных препаратов для человека.EMEA CPMP / BWP / 1793/02, 2003. www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2009/09/WC500003675. pdf.
Хейсканен А., Сатомаа Т., Тийтинен С., Лайтинен А., Маннелин С., Импола Ю., Миккола М., Олссон С., Миллер-Подраза Х, Бломквист М., Олонен А., Сало Х, Лехенкари П., Туури Т., Отонкоски Т., Натунен Дж., Сааринен Дж., Лайне Дж.: Загрязнение ксеноантигеном N-гликолилнейраминовой кислоты человеческих эмбриональных и мезенхимальных стволовых клеток в значительной степени обратимо.Стволовые клетки 2007; 25: 197-202.
Horwitz EM, Prockop DJ, Gordon PL, Koo WW, Fitzpatrick LA, Neel MD, McCarville ME, Orchard PJ, Pyeritz RE, Brenner MK: Клинические реакции на трансплантацию костного мозга у детей с тяжелым несовершенным остеогенезом. Кровь 2001; 97: 1227-1231.
Spees JL, Gregory CA, Singh H, Tucker HA, Peister A, Lynch PJ, Hsu SC, Smith J, Prockop DJ: Интернализованные антигены должны быть удалены, чтобы подготовить гипоиммуногенные мезенхимальные стволовые клетки для клеточной и генной терапии. Мол Тер 2004; 9: 747-756.
Маннелло Ф., Тонти Г.А.: Краткий обзор: никаких достижений в культуре мезенхимальных и эмбриональных стволовых клеток человека: кондиционированная среда, питающий слой или без питателя; среда с эмбриональной телячьей сывороткой, человеческой сывороткой или обогащенной плазмой; Бессывороточная некондиционированная среда, замещающая сыворотка или специальная смесь? Все, что блестит, не золото! Стволовые клетки 2007; 25: 1603-1609.
Tekkatte C, Gunasingh GP, Cherian KM, Sankaranarayanan K: «Гуманизированные» методы культивирования стволовых клеток: споры о сыворотке животных. Стволовые клетки Int 2011; 2011: 504723.
Kinzebach S, Bieback K: Экспансия мезенхимальных стволовых / стромальных клеток в условиях культивирования без ксеногенов.Adv Biochem Eng Biotechnol 2013; 129: 33-57.
Kilian O, Flesch I, Wenisch S, Taborski B, Jork A, Schnettler R, Jonuleit T: Влияние факторов роста тромбоцитов на мезенхимальные стволовые клетки человека и эндотелиальные клетки человека in vitro. Eur J Med Res 2004; 9: 337-344.
Gruber R, Karreth F, Kandler B, Fuerst G, Rot A, Fischer MB, Watzek G: супернатанты, высвобождаемые тромбоцитами, увеличивают миграцию и пролиферацию и уменьшают остеогенную дифференцировку мезенхимальных клеток-предшественников костного мозга в условиях in vitro.Тромбоциты 2004; 15: 29-35.
Kocaoemer A, Kern S, Klüter H, Bieback K: человеческая сыворотка AB и тромбин-активированная богатая тромбоцитами плазма являются подходящими альтернативами фетальной сыворотке теленка для размножения мезенхимальных стволовых клеток из жировой ткани. Стволовые клетки 2007; 25: 1270-1278.
Bieback K, Hecker A, Kocaomer A, Lannert H, Schallmoser K, Strunk D, Kluter H: Человеческие альтернативы фетальной бычьей сыворотке для размножения мезенхимальных стромальных клеток из костного мозга.Стволовые клетки 2009; 27: 2331-2341.
Muller AM, Davenport M, Verrier S, Droeser R, Alini M, Bocelli-Tyndall C, Schaefer DJ, Martin I, Scherberich A: Лизат тромбоцитов в качестве заменителя сыворотки для 2d статической и 3d перфузионной культуры клеток стромальной сосудистой фракции из жировой ткани человека салфетка.Tissue Eng Часть A 2009; 15: 869-875.
Бернардо М.Э., Комета А.М., Пальяра Д., Винти Л., Росси Ф., Кристантиелли Р., Палумбо Г., Локателли Ф: Ex vivo экспансия мезенхимальных стромальных клеток. Лучшая практика Res Clin Haematol 2011; 24: 73-81.
Fekete N, Gadelorge M, Furst D, Maurer C, Dausend J, Fleury-Cappellesso S, Mailander V, Lotfi R, Ignatius A, Sensebe L, Bourin P, Schrezenmeier H, Rojewski MT: лизат тромбоцитов из объединенных тромбоцитов цельной крови концентраты и концентраты тромбоцитов, полученные из афереза, для выделения и размножения мезенхимальных стромальных клеток костного мозга человека: процесс производства, содержание и идентификация активных компонентов.Цитотерапия 2012; 14: 540-554.
Schrezenmeier H, Seifried E: Объединенные концентраты тромбоцитов, полученные из лейкоцитов, и концентраты тромбоцитов афереза: какой тип продукта следует предпочесть? Vox Sang 2010; 99: 1-15.
Rauch C, Feifel E, Amann EM, Spotl HP, Schennach H, Pfaller W, Gstraunthaler G: Альтернативы использованию фетальной бычьей сыворотки: лизаты тромбоцитов человека в качестве заменителя сыворотки в средах для культивирования клеток.Altex-Altern Anim Ex 2011; 28: 305-316.
Avanzini MA, Bernardo ME, Cometa AM, Perotti C, Zaffaroni N, Novara F, Visai L, Moretta A, Del Fante C, Villa R, Ball LM, Fibbe WE, Maccario R, Locatelli F: Генерация мезенхимальных стромальных клеток в присутствие лизата тромбоцитов: фенотипическое и функциональное сравнение предшественников из пуповинной крови и костного мозга.Haematologica 2009; 94: 1649-1660.
Schallmoser K, Bartmann C, Rohde E, Reinisch A, Kashofer K, Stadelmeyer E, Drexler C, Lanzer G, Linkesch W., Strunk D. Лизат тромбоцитов человека может заменить фетальную бычью сыворотку для увеличения функциональных мезенхимальных стромальных клеток в клиническом масштабе.Переливание 2007; 47: 1436-1446.
Crespo-Diaz R, Behfar A, Butler GW, Padley DJ, Sarr MG, Bartunek J, Dietz AB, Terzic A: Лизат тромбоцитов, состоящий из протеома естественной репарации, поддерживает пролиферацию мезенхимальных стволовых клеток и хромосомную стабильность. Трансплантация клеток 2011; 20: 797-811.
Бернардо М.Э., Аванзини М.А., Перотти С., Комета А.М., Моретта А., Лента Е, Дель Фанте С., Новара Ф., де Сильвестри А., Амендола Г., Зуффарди О., Маккарио Р., Локателли Ф: Оптимизация in vitro расширения мультипотентных мезенхимальных веществ человека. стромальные клетки для подходов к клеточной терапии: дальнейшее понимание в поисках заменителя фетальной телячьей сыворотки.J. Cell Physiol 2007; 211: 121-130.
Lange C, Cakiroglu F, Spiess AN, Cappallo-Obermann H, Dierlamm J, Zander AR: Ускоренное и безопасное размножение мезенхимальных стромальных клеток человека в бессывороточной среде животных для трансплантации и регенеративной медицины. J. Cell Physiol 2007; 213: 18-26.
Schallmoser K, Strunk D: Приготовление объединенного лизата тромбоцитов человека (phpl) в качестве эффективной добавки для бессывороточных культур стволовых клеток человека. Журнал Vis Exp 2009; (32) .pii: 1523. doi: 10.3791 / 1523.
Rojewski MT, Fekete N, Baila S, Nguyen K, Furst D, Antwiler D, Dausend J, Kreja L, Ignatius A, Sensebe L, Schrezenmeier H: выделение и распространение МСК костного мозга в закрытых, автоматизированных устройство системы расширения квантовой ячейки.Пересадка клеток 2012; http://dx.doi.org/10.3727/096368912X657990.
Nold P, Brendel C, Neubauer A, Bein G, Hackstein H: Соответствующее надлежащей производственной практике расширение мезенхимальных стромальных клеток, полученных из костного мозга человека, без содержания животных в закрытом биореакторе на основе полых волокон.Biochem Biophys Res Commun 2013; 430: 325-330.
Salvade A, Della Mina P, Gaddi D, Gatto F, Villa A, Bigoni M, Perseghin P, Serafini M, Zatti G, Biondi A, Biagi E: характеристика мезенхимальных стромальных клеток, культивируемых с помощью лизата тромбоцитов, и их потенциальное использование в тканевой инженерии остеогенные устройства для лечения дефектов костей.Tissue Eng Часть C Методы 2010; 16: 201-214.
Dahl JA, Duggal S, Coulston N, Millar D, Melki J, Shahdadfar A, Brinchmann JE, Collas P: Генетическая и эпигенетическая нестабильность мезенхимальных стволовых клеток костного мозга человека, размноженных в аутологичной сыворотке или фетальной бычьей сыворотке. Инт Дж. Дев Биол 2008; 52: 1033-1042.
Бочелли-Тиндалл С., Зажак П., Ди Маджио Н., Трелла Е, Бенвенуто Ф., Иеззи Дж., Шерберих А., Барберо А., Шерен С., Пистойя V, Спаньоли Дж., Вукчевич М., Мартин I, Тиндаль А.: фактор роста фибробластов 2 и Фактор роста тромбоцитов, но не лизат тромбоцитов, индуцирует зависимый от пролиферации антиген главного комплекса гистосовместимости функционального класса II в мезенхимальных стволовых клетках человека.Arthritis Rheum 2010; 62: 3815-3825.
Flemming A, Schallmoser K, Strunk D, Stolk M, Volk HD, Seifert M: иммуномодулирующая эффективность мезенхимальных стволовых клеток костного мозга, культивируемых в лизате тромбоцитов человека. Дж. Клин Иммунол 2011; 31: 1143-1156.
Abdelrazik H, Spaggiari GM, Chiossone L, Moretta L: мезенхимальные стволовые клетки, размноженные в лизате тромбоцитов человека, демонстрируют пониженную ингибирующую способность в отношении пролиферации и функции Т- и NK-клеток.Eur J Immunol 2011; 41: 3281-3290.
Bieback K, Ha VA, Hecker A, Grassl M, Kinzebach S, Solz H, Sticht C, Kluter H, Bugert P: Измененная экспрессия генов в жировых стволовых клетках человека, культивируемых с фетальной бычьей сывороткой, по сравнению с человеческими добавками. Tissue Eng Часть A 2010; 16: 3467-3484.
Dreher L, Elvers-Hornung S, Brinkmann I, Huck V, Henschler R, Gloe T, Kluter H, Bieback K: культивирование в сыворотке крови человека снижает адгезию мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани к ламинину и эндотелию и снижает захват капилляров. Разработка стволовых клеток, 2013; 22: 791-803.
Lucchini G, Introna M, Dander E, Rovelli A, Balduzzi A, Bonanomi S, Salvade A, Capelli C, Belotti D, Gaipa G, Perseghin P, Vinci P, Lanino E, Chiusolo P, Orofino MG, Marktel S, Golay J , Rambaldi A, Biondi A, D’Amico G, Biagi E: мезенхимальные стромальные клетки, увеличенные с помощью лизата тромбоцитов, как спасательная терапия для лечения тяжелой резистентной реакции трансплантат против хозяина в педиатрической популяции.Пересадка костного мозга Biol 2010; 16: 1293-1301.
Lee RH, Pulin AA, Seo MJ, Kota DJ, Ylostalo J, Larson BL, Semprun-Prieto L, Delafontaine P, Prockop DJ: внутривенные hMSC улучшают инфаркт миокарда у мышей, потому что клетки, эмболизированные в легких, активируются, чтобы секретировать противовоспалительный белок. ТСГ-6.Cell Stem Cell 2009; 5: 54-63.
Dozza B, Di Bella C, Lucarelli E, Giavaresi G, Fini M, Tazzari PL, Giannini S, Donati D: мезенхимальные стволовые клетки и лизат тромбоцитов в фибриновом или коллагеновом каркасе способствуют интеграции нецементированного протеза бедра. Журнал Ортоп Рес 2011; 29: 961-968.
Chevallier N, Anagnostou F, Zilber S, Bodivit G, Maurin S, Barrault A, Bierling P, Hernigou P, Layrolle P, Rouard H: Остеобластная дифференцировка мезенхимальных стволовых клеток человека с помощью лизата тромбоцитов. Биоматериалы 2010; 31: 270-278.
Centeno CJ, Schultz JR, Cheever M, Freeman M, Faulkner S, Robinson B, Hanson R: Безопасность и осложнения, сообщающие обновленную информацию о повторной имплантации мезенхимальных стволовых клеток, выращенных в культуре, с использованием метода аутологичного лизата тромбоцитов.Curr Stem Cell Res Ther 2011; 6: 368-378.
Lange C, Brunswig-Spickenheier B, Eissing L, Scheja L: Лизат тромбоцитов подавляет экспрессию простагландин d2-синтазы липокалинового типа, которая положительно контролирует адипогенную дифференцировку мезенхимальных стромальных клеток человека. Exp Cell Res 2012; 318: 2284-2296.
Murphy MB, Blashki D, Buchanan RM, Yazdi IK, Ferrari M, Simmons PJ, Tasciotti E: богатая тромбоцитами плазма взрослых и пуповинной крови для пролиферации мезенхимальных стволовых клеток, хемотаксиса и криоконсервации. Биоматериалы 2012; 33: 5308-5316.
Lohmann M, Walenda G, Hemeda H, Joussen S, Drescher W, Jockenhoevel S, Hutschenreuter G, Zenke M, Wagner W: Возраст донора лизата тромбоцитов человека влияет на пролиферацию и дифференцировку мезенхимальных стволовых клеток.PLoS One 2012; 7: e37839.
Зензель Л., Гнатенко Д.В., Бахоу В.Ф .: Протеом тромбоцитов. Курр Опин Гематол 2009; 16: 329-333.
Ng F, Boucher S, Koh S, Sastry KS, Chase L, Lakshmipathy U, Choong C, Yang Z, Vemuri MC, Rao MS, Tanavde V: передача сигналов PDGF, TGF-бета и FGF важна для дифференциации и роста мезенхимальных клеток. стволовые клетки (МСК): профилирование транскрипции может идентифицировать маркеры и сигнальные пути, важные для дифференциации МСК на адипогенные, хондрогенные и остеогенные клоны.Кровь 2008; 112: 295-307.
Perez-Ilzarbe M, Diez-Campelo M, Aranda P, Tabera S, Lopez T, del Canizo C, Merino J, Moreno C, Andreu EJ, Prosper F, Perez-Simon JA: Сравнение условий культивирования ex vivo мезенхимального стебля клетки для клеточной терапии человека. Переливание 2009; 49: 1901-1910.
Janetzko K, Bugert P: Уменьшение количества патогенов в продуктах крови: что стоит за этими методами? Transfus Med Hemother 2011; 38: 5-6.
Штал М., Карлссон Б., Ле Блан К., Корсгрен О., Кнутсон Ф .: Фотохимическая инактивация патогенов в сыворотке крови человека позволяет широко применять ее в клинической трансплантации клеток.Vox Sang 2010; 98: e364-365.
Shih DT, Chen JC, Chen WY, Kuo YP, Su CY, Burnouf T: Расширение мезенхимальных стромальных предшественников жировой ткани в бессывороточной среде с добавлением инактивированного вирусами аллогенного лизата тромбоцитов человека. Переливание 2011; 51: 770-778.
Фон Бонин М., Штольцель Ф, Годеке А., Рихтер К., Вушек Н., Холиг К., Платцбекер Ю., Илмер Т., Шайх М., Шетелиг Дж., Киани А., Ордеманн Р., Энингер Г., Шмитц М., Борнхаузер М. Лечение рефрактерной острой РТПХ со сторонними МСК увеличивалась в среде, содержащей лизат тромбоцитов.Трансплантация костного мозга 2009; 43: 245-251.
Le Blanc K, Frassoni F, Ball L, Locatelli F, Roelofs H, Lewis I, Lanino E, Sundberg B, Bernardo ME, Remberger M, Dini G, Egeler RM, Bacigalupo A, Fibbe W, Ringden O: мезенхимальные стволовые клетки для лечение стероидорезистентной, тяжелой, острой болезни «трансплантат против хозяина»: исследование фазы II.Ланцет 2008; 371: 1579-1586.

Автор Контакты

PD Доктор Карен Бибак

Институт трансфузионной медицины и иммунологии

Медицинский факультет Мангейм, Гейдельбергский университет

Немецкая служба крови Красного Креста Баден-Вюртемберг — Гессен

Friedrich-Ebert Straße 107, 68167 Mannheim, Germany

[email protected]

Подробности статьи / публикации

Предварительный просмотр первой страницы

Получено: 23 мая 2013 г.
Принято: 1 июля 2013 г.
Опубликовано в Интернете: 26 августа 2013 г.
Дата выпуска: октябрь 2013 г.

Количество страниц для печати: 10
Количество рисунков: 0
Количество столов: 0

ISSN: 1660-3796 (печатный)
eISSN: 1660-3818 (онлайн)

Для дополнительной информации: https: // www.karger.com/TMH

Авторские права / Дозировка препарата / Заявление об ограничении ответственности

Авторские права: Все права защищены. Никакая часть данной публикации не может быть переведена на другие языки, воспроизведена или использована в любой форме и любыми средствами, электронными или механическими, включая фотокопирование, запись, микрокопирование или с помощью какой-либо системы хранения и поиска информации, без письменного разрешения издателя. .
Дозировка лекарства: авторы и издатель приложили все усилия, чтобы гарантировать, что выбор и дозировка лекарства, указанные в этом тексте, соответствуют текущим рекомендациям и практике на момент публикации.Однако ввиду продолжающихся исследований, изменений в правительственных постановлениях и постоянного потока информации, касающейся лекарственной терапии и реакций на них, читателю настоятельно рекомендуется проверять листок-вкладыш для каждого препарата на предмет любых изменений показаний и дозировки, а также дополнительных предупреждений. и меры предосторожности. Это особенно важно, когда рекомендованным агентом является новый и / или редко применяемый препарат.
Отказ от ответственности: утверждения, мнения и данные, содержащиеся в этой публикации, принадлежат исключительно отдельным авторам и соавторам, а не издателям и редакторам.Появление в публикации рекламы и / или ссылок на продукты не является гарантией, одобрением или одобрением рекламируемых продуктов или услуг или их эффективности, качества или безопасности. Издатель и редактор (-ы) не несут ответственности за любой ущерб, причиненный людям или имуществу в результате любых идей, методов, инструкций или продуктов, упомянутых в контенте или рекламе.

Вес блоков ФБС | Фундамент для Дома

Основные типы бетонных блоков и их вес

Зависимость веса ФБС блоков от размеров

Зачем необходимо знать массу ФБС блоков

Блоки ФБС размеры согласно ГОСТ 13579-78, База ЖБИ.

Размеры фундаментных блоков

Блоки ФБС размеры и цены

Статьи — Фундаментные блоки ФБС: технические характеристики, виды, укладка

Изготовление блоков ФБС для фундамента

Конструктивные особенности

Характеристика фундаментных блоков

Сфера применения

Виды фундаментных блоков

Фундамент из фундаментных блоков: основные плюсы и минусы

Особенности расчета количества блоков ФБС

Технология монтажа фундаментных блоков

ФБС 24-6-6 т по стандарту: ГОСТ 13579-78

зачем его знать и таблица типовых показателей

Общие характеристики

Зачем нужно знать вес плит

Блоки ФБС : ООО ПК Равновесие

Маркировка, размеры и виды бетонных блоков под фундамент

Особенности производства

Преимущества бетонных фундаментных блоков

Фундаментные блоки (ФБС) в Набережных Челнах

Каталог ФБС

Преимущество использования ФБС

Таблица размеров фундаментных блоков

Доставка продукции

Сравнительный анализ дифференциально секретируемых белков в бессывороточной и содержащей сыворотку средах с использованием BONCAT и импульсного SILAC

Культура клеток и импульсное мечение с AHA и SILAC

Обогащение вновь синтезированных белков с помощью фильтра и переваривание на гранулах

Жидкостная хроматография и тандемная масс-спектрометрия (LC-MS / MS)

Анализ масс-спектрометрических данных

Совместное культивирование хондроцитов и hWJ-MSC

Анализ пролиферации клеток

Вестерн-блот-анализ

Биоинформатический анализ

Avantor Fetal Bovine Serum (FBS), происхождение из США

Протокол иммунофлуоресценции с фиксацией формальдегидом

A. Растворы и реагенты

Б. Фиксация

C. Иммуноокрашивание

UMass Football одержал первую победу в FBS с 22-14 победами над Akron

Часто задаваемые вопросы

ОБЩЕЕ

ВОССТАНОВЛЕНИЕ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ

СТРУКТУРА САХАРА

ELISA

ОБЩЕЕ

ВОССТАНОВЛЕНИЕ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ

СТРУКТУРА САХАРА

ELISA

Лизат тромбоцитов как замена фетальной бычьей сыворотки в культурах мезенхимальных стромальных клеток — FullText — Transfusion Medicine and Hemotherapy 2013, Vol. 40, № 5

Абстрактные

Тромбоцитарные факторы для клеточной культуры и регенерации тканей

Рис. 1

Мезенхимальные стволовые / стромальные клетки

На пути к производству мезенхимальных стромальных клеток без ксеногенов

Релизат тромбоцитов

Лизат тромбоцитов

Критерии качества лизата тромбоцитов

Аутологичный или аллогенный

Концентрация тромбоцитов

Срок годности концентратов тромбоцитов до производства HPL

Плазма или аддитивный раствор для тромбоцитов

Баффи или концентраты тромбоцитов, полученные из афереза ​​

Специфические цитокины

Стратегии уменьшения патогенов

Клинические испытания мезенхимальных стромальных клеток в добавках для человека

Заключение

Выражение признательности

Заявление о раскрытии информации

Список литературы

Автор Контакты

Подробности статьи / публикации

Авторские права / Дозировка препарата / Заявление об ограничении ответственности

Добавить комментарий Отменить ответ

Баффи или концентраты тромбоцитов, полученные из афереза